抗人乳腺癌重組免疫毒素M-,4-G-,3--ScFv-PE40的原核表達及活性研究.pdf

1、將已構(gòu)建好的抗人乳腺癌基因工程抗體免疫毒素M<,4>G<,3>/ScFv-PE40基因進行原核表達,并對誘導(dǎo)表達條件、表達量、包涵體的分離純化、溶解和復(fù)性進行探索,得到重組蛋白M<,4>G<,3>/ScFv-PE40,Western blot證實其符合重組蛋白的結(jié)構(gòu)要求,進而研究其對人乳腺癌細胞的靶向作用及其體外細胞殺傷活性,從而為乳腺癌的生物治療提供新的手段奠定實驗基礎(chǔ).方法:1、表達體系的構(gòu)建:將M<,4>G<,3>/ScFv-PE

2、40用NcoⅠ、HindⅢ從T載體上雙酶切下來,與同樣雙酶切后的載體pET26b(+)相連,轉(zhuǎn)化克隆菌株DH5 α,酶切鑒定正確后轉(zhuǎn)化BL21(DE3)溶原菌;2、優(yōu)化表達目的蛋白及鑒定:以不同濃度的IPTG誘導(dǎo)ScFv-PE40表達,做SDS-PAGE凝膠電泳分析其分子量大小、表達量,Western blot證實其符合重組蛋白的結(jié)構(gòu)要求;3、ScFv-PE40的復(fù)性:大量表達目的蛋白,進行包涵體的分離純化、溶解和復(fù)性探索;4、ScFv