脈絡(luò)膜新生血管膜與VEGF、PEDF的相關(guān)病理機制及臨床治療研究.pdf

1、本研究分為三部分: 第一部分曲安奈德對人視網(wǎng)膜色素上皮細胞和人臍靜脈內(nèi)皮細胞VEGF、PEDF表達的影響 [目的]觀察曲安奈德(triamcinoloneacetonide，TA)對培養(yǎng)的人視網(wǎng)膜色素上皮細胞(humanretinalpigmentepithelial，ARPE19)和人臍靜脈內(nèi)皮細胞(humanumbilicalveinendothelial，HUVE)的血管內(nèi)皮生長因子(vascularendothe

2、lialgrowthfactor，VEGF)和色素上皮衍生因子(pigmentepithelium-derivedfactor，PEDF)表達的影響，以探討曲安奈德和VEGF、PEDF的關(guān)聯(lián)。 [方法]選用培養(yǎng)的ARPE19和HUVE細胞，實驗組應(yīng)用濃度為0.1mg/ml和1mg/ml曲安奈德混合培養(yǎng)液，對照組應(yīng)用曲安奈德藥物添加劑混合培養(yǎng)液。收集實驗組和對照組加入曲安奈德或藥物添加劑后各個時間點(0，10分鐘，30分鐘，1小時

3、，3小時，6小時，12小時，24小時，2天和3天)的細胞和培養(yǎng)液。提取細胞的總RNA，RNA逆轉(zhuǎn)錄后，采用實時反轉(zhuǎn)錄定量PCR法(RealtimeReverseTranscriptionPolymeraseChainReaction，RealtimeRT-PCR)測定細胞的VEGF、PEDF的mRNA表達。應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附測定法(enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA)檢測各時間點培養(yǎng)液中的VEGF，P

4、EDF含量。 [結(jié)果]對于ARPE19細胞，實時RT-PCR的結(jié)果顯示實驗組和對照組之間VEGF165和PEDFmRNA的表達差異有顯著性。加入TA后3小時，實驗組VEGF165的mRNA表達顯著低于對照組，為對照組的0.5±0.05倍(P=0.00012)。實驗組PEDF的mRNA表達則高于對照組，為對照組的2.5±0.07倍(P＜0.0001)。TA兩個不同濃度對VEGF和PEDF的表達水平的影響無顯著性差異，但兩組作用的持

5、續(xù)時間有顯著性差異，0.1mg/ml濃度的TA作用持續(xù)時間為12小時(P=0.00018)，1mg/ml濃度的TA作用持續(xù)時間為24小時(P=0.0007)。ELISA檢測結(jié)果顯示，培養(yǎng)液中VEGF和PEDF的蛋白表達與其細胞內(nèi)的mRNA的表達相一致，加入TA3小時后，培養(yǎng)液中VEGF165的含量明顯低于對照組(P=0.001)，而PEDF含量較對照組顯著升高(P=0.002)。 TA對HUVE細胞VEGF165和PEDFmRN

6、A表達的影響與ARPE19細胞相似。實時RT-PCR的結(jié)果顯示，加入TA后3小時，實驗組VEGF165的mRNA表達顯著低于對照組，為對照組的0.5±0.05倍(P=0.0006)。實驗組PEDF的mRNA表達則高于對照組，為對照組的2.2±0.06倍(P=0.00005)。然而HUVE細胞培養(yǎng)液中的VEGF165含量很少，低于100pg/ml，PEDF的含量低于檢測濃度(＜1ng/ml)，實驗組和對照組之間無顯著性差異。 [結(jié)

7、論]TA能抑制ARPE19和HUVE細胞VEGF的表達，同時促進兩種細胞PEDF的表達。 第二部分脈絡(luò)膜新生血管患者房水中VEGF和PEDF的含量測定 [目的]研究血管內(nèi)皮生長因子(vascularendothelialgrowthfactor，VEGF)和色素上皮衍生因子(pigmentepithelium-derivedfactor,PEDF)在活動性脈絡(luò)膜新生血管膜(choroidalneovascularizat

8、ion，CNV)患者房水中的表達。初步探討息肉狀脈絡(luò)膜血管病變(polypoidalchoroidalvasculopathy，PCV)和其他類型的CNV患者房水中的VEGF和PEDF的表達。 [方法]應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附測定法(enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA)法，檢測實驗組：包括12例12眼年齡相關(guān)性黃斑變性活動性CNV患者(AMD組)，9例9眼病理性近視活動性CNV患者(近視組)，11例

9、11眼活動性PCV患者(PCV組)；以及對照組：同期年齡對照的10例白內(nèi)障患者的房水標(biāo)本中VEGF,PEDF的含量。 [結(jié)果]實驗組房水中的VEGF含量為523.0±273.7pg/ml，對照組房水中的VEGF含量為108.3±72.3pg/ml。兩組相比差異有極顯著性意義(P＜0.001)。其中PCV組房水中的VEGF含量為402.8±229.9pg/ml，AMD組房水中的VEGF含量為668.9±340.0pg/ml，近視組

10、房水中的VEGF含量為475.31±102.8pg/ml。各組分別與對照組相比，均有極顯著性差異。(P=0.001，P＜0.001，P＜0.001).PCV組房水中的VEGF含量顯著低于AMD組(P=0.045)，與近視組無顯著性差異(P=0.394)。 實驗組房水中的PEDF含量為16.58±13.11ng/ml，對照組房水中的PEDF含量為0.35±0.57ng/ml，兩者相比差異有極顯著性意義(P=0.000)。其中PCV

11、組房水中的PEDF含量為10.85±6.36ng/ml，AMD組房水中的PEDF含量為20.68±7.27ng/ml，近視組房水中的PEDF含量為18.11±21.68ng/ml。各組分別與對照組相比，均顯著高于對照組。(P＜0.001，P＜0.001，P=0.019)。PCV組房水中的PEDF含量顯著低于AMD組(P=0.002)，與近視組無顯著性差異(P=0.302)。各樣本的VEGF和PEDF呈顯著的正相關(guān)(r=0.388，P=0

12、.028)。 [結(jié)論]各型活動性CNV患者和PCV患者房水中的VEGF，PEDF含量均顯著高于對照組，PCV和AMD脈絡(luò)膜新生血管膜患者房水中的VEGF和PEDF含量有所不同。 第三部分光動力療法聯(lián)合玻璃體腔注射曲安奈德治療年齡相關(guān)性黃斑變性中心凹下脈絡(luò)膜新生血管膜的臨床研究 [目的]探討光動力療法(photodynamictherapy，PDT)聯(lián)合玻璃體腔注射曲安奈德(intravitrealtriamcin

13、olone，IVTA)治療年齡相關(guān)性黃斑變性(age-relatedmaculardegeneration，AMD)中心凹下脈絡(luò)膜新生血管膜(choroidalneovascularisation，CNV)的安全性和有效性。 [方法]采用前瞻性非隨機對照研究方法。實驗組選用24例24眼年齡相關(guān)性黃斑變性中心凹下脈絡(luò)膜新生血管膜患者行光動力療法聯(lián)合玻璃體腔注射曲安奈德治療。對照組選用病程、年齡、性別、晶狀體透明度、CNV大小、CN

14、V類型、LogMAR最佳矯正視力(best-correctedvisualacuity，BCVA)和眼內(nèi)壓(intraocularpressure，IOP)與實驗組配對的年齡相關(guān)性黃斑變性中心凹下脈絡(luò)膜新生血管膜患者，行單純PDT治療，共24例。所有病例均完成每3月隨訪一次，隨訪1年。主要檢測指標(biāo)：平均LogMARBCVA，平均BCVA變化行數(shù)，BCVA下降行數(shù)小于3行的患者比例，平均治療次數(shù)和并發(fā)癥。 [結(jié)果]實驗組24例24

15、眼行PDT聯(lián)合IVTA治療的患者，治療前平均logMARBCVA為0.88，治療后1年為0.95，治療前后差異無顯著性意義(P=0.32)。對照組24例24眼行單純PDT治療的患者，治療前平均logMARBCVA為0.74，治療后1年為1.09，治療前后差異有顯著性意義(P＜0.001)。實驗組平均BCVA下降的行數(shù)顯著低于對照組，分別下降0.7和3.5行(P=0.015)。BCVA下降行數(shù)小于3行的患者比例，一年后實驗組和對照組分別為

16、17眼(70.8％)和8眼(33.3％)，兩者差異有顯著性意義(P=0.009)。兩組的平均治療次數(shù)為1.50和1.96次，雖然實驗組的平均治療次數(shù)少于對照組，但差異無顯著性意義(P=0.076)。將所有病例按CNV的類型分為典型性CNV和隱匿性CNV兩組，研究結(jié)果顯示PDT聯(lián)合IVTA治療對防止兩種類型的CNV患者視力下降均有效。PDT聯(lián)合IVTA治療的并發(fā)癥包括：33.33％的患者有短暫的眼內(nèi)壓升高，局部使用抗青光眼滴眼液治療后恢復(fù)