OPN在脈絡(luò)膜新生血管生成中作用的研究.pdf_第1頁(yè)
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1、背景與目的:
  年齡相關(guān)性黃斑變性、眼組織胞漿菌病綜合癥、特發(fā)性脈絡(luò)膜新生血管等多種視網(wǎng)膜脈絡(luò)膜疾病的發(fā)生發(fā)展與脈絡(luò)膜新生血管(CNV)有關(guān)。新生血管從脈絡(luò)膜長(zhǎng)出后突破Bruch膜后長(zhǎng)入視網(wǎng)膜色素上皮下間隙或神經(jīng)上皮下,由于新生血管不成熟,易發(fā)生出血和滲漏等改變,繼而形成瘢痕,造成局部損傷,這些損傷好發(fā)于黃斑區(qū),對(duì)中心視力影響較大,因此CNV是造成視力喪失的重要原因之一。脈絡(luò)膜新生血管的形成是一個(gè)復(fù)雜過(guò)程,其發(fā)生機(jī)制尚未闡明,受

2、多種因素調(diào)控。目前已證實(shí),CNV是由多種可以產(chǎn)生細(xì)胞因子的細(xì)胞組成,CNV的生成受細(xì)胞因子及細(xì)胞外基質(zhì)之間相互作用的調(diào)控。新近研究發(fā)現(xiàn),骨橋蛋白(osteopontin,OPN)作為細(xì)胞外基質(zhì)中的一種重要的粘附蛋白,可促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖和內(nèi)皮細(xì)胞管狀生成,促進(jìn)視網(wǎng)膜新生血管的形成,抗OPN抗體可顯著抑制VEGF誘導(dǎo)的新生血管管狀生成。已有學(xué)者證實(shí)內(nèi)源性O(shè)PN在激光誘導(dǎo)的小鼠CNV形成過(guò)程中表達(dá)量增高,并猜測(cè)OPN在CNV的形成過(guò)程中發(fā)

3、揮重要作用,但其具體機(jī)制尚不明確。本研究旨在探討OPN在激光誘導(dǎo)的小鼠CNV生成中的作用,為臨床防治CNV類疾病提供新的思路。
  材料和方法:
  1.選SPF級(jí)C57BL/6J雄性小鼠40只,氬激光(532nm)視網(wǎng)膜光凝建立CNV模型。造模成功的小鼠36只,隨機(jī)分成3組,分別為A組、B組及C組。
  2.光凝后第2天,A組腹腔注射400μg抗OPN抗體,B組注射腹腔400μg小鼠IgG,C組腹腔注射400μg P

4、BS。
  3.光凝后第7天,各組分別做熒光素眼底造影(FFA)檢查。
  4.光凝后第14天摘除眼球,每組中隨機(jī)取4只行脈絡(luò)膜鞏膜鋪片熒光抗體染色及CNV面積定量分析。
  7.每組其余8只,分離脈絡(luò)膜后,采用熒光定量PCR檢測(cè)各組OPN及VEGF基因的表達(dá)。
  結(jié)果:
  1.光凝后第7天:FFA均顯示光凝處熒光素滲漏,提示建模成功。
  2.光凝后第14天:脈絡(luò)膜鋪片熒光抗體染色顯示,在激光光

5、凝處可見(jiàn)綠色團(tuán)狀強(qiáng)熒光影其形態(tài)如煙花爆破樣,定量分析各組CNV面積(均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差),分別為A組(16.98±0.70)×103μm2、B組(27.13±0.81)×103μm2、C組(35.39±2.14)×103μm2,各組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=533.76,P=0.000);
  3.光凝后第14天:Real Time-PCR檢測(cè)顯示,A組VEGF基因表達(dá)明顯降低(t=-6.74,P=0.007<0.05),A、B兩組OP

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