OPN在脈絡膜新生血管生成中作用的研究.pdf

1、背景與目的：
　　年齡相關性黃斑變性、眼組織胞漿菌病綜合癥、特發(fā)性脈絡膜新生血管等多種視網膜脈絡膜疾病的發(fā)生發(fā)展與脈絡膜新生血管(CNV)有關。新生血管從脈絡膜長出后突破Bruch膜后長入視網膜色素上皮下間隙或神經上皮下，由于新生血管不成熟，易發(fā)生出血和滲漏等改變，繼而形成瘢痕，造成局部損傷，這些損傷好發(fā)于黃斑區(qū)，對中心視力影響較大，因此CNV是造成視力喪失的重要原因之一。脈絡膜新生血管的形成是一個復雜過程，其發(fā)生機制尚未闡明，受

2、多種因素調控。目前已證實，CNV是由多種可以產生細胞因子的細胞組成，CNV的生成受細胞因子及細胞外基質之間相互作用的調控。新近研究發(fā)現，骨橋蛋白（osteopontin，OPN）作為細胞外基質中的一種重要的粘附蛋白，可促進血管內皮細胞增殖和內皮細胞管狀生成，促進視網膜新生血管的形成，抗OPN抗體可顯著抑制VEGF誘導的新生血管管狀生成。已有學者證實內源性OPN在激光誘導的小鼠CNV形成過程中表達量增高，并猜測OPN在CNV的形成過程中發(fā)

3、揮重要作用，但其具體機制尚不明確。本研究旨在探討OPN在激光誘導的小鼠CNV生成中的作用，為臨床防治CNV類疾病提供新的思路。
　　材料和方法：
　　1.選SPF級C57BL/6J雄性小鼠40只，氬激光(532nm)視網膜光凝建立CNV模型。造模成功的小鼠36只，隨機分成3組，分別為A組、B組及C組。
　　2.光凝后第2天，A組腹腔注射400μg抗OPN抗體，B組注射腹腔400μg小鼠IgG，C組腹腔注射400μg P

4、BS。
　　3.光凝后第7天，各組分別做熒光素眼底造影(FFA)檢查。
　　4.光凝后第14天摘除眼球，每組中隨機取4只行脈絡膜鞏膜鋪片熒光抗體染色及CNV面積定量分析。
　　7.每組其余8只，分離脈絡膜后，采用熒光定量PCR檢測各組OPN及VEGF基因的表達。
　　結果：
　　1.光凝后第7天:FFA均顯示光凝處熒光素滲漏，提示建模成功。
　　2.光凝后第14天:脈絡膜鋪片熒光抗體染色顯示，在激光光

5、凝處可見綠色團狀強熒光影其形態(tài)如煙花爆破樣，定量分析各組CNV面積（均數±標準差），分別為A組(16.98±0.70)×103μm2、B組(27.13±0.81)×103μm2、C組(35.39±2.14)×103μm2，各組間差異均有統(tǒng)計學意義(F=533.76，P=0.000);
　　3.光凝后第14天:Real Time-PCR檢測顯示，A組VEGF基因表達明顯降低（t=-6.74，P=0.007＜0.05），A、B兩組OP