外源基因neo表達(dá)對(duì)轉(zhuǎn)基因豬腸道菌群耐藥性與非期望效應(yīng)的影響評(píng)估.pdf

1、neo基因作為標(biāo)記基因被廣泛應(yīng)用于轉(zhuǎn)基因動(dòng)、植物研究中，neo基因的表達(dá)可能導(dǎo)致的各種副作用及安全隱患也越來(lái)越引起大眾的關(guān)注和擔(dān)憂。
　　本實(shí)驗(yàn)將半同胞的兩窩F1代陰性豬和轉(zhuǎn)neo基因豬隨機(jī)分為兩組。A組在1.5月齡時(shí)飼喂7天（一個(gè)療程）添加硫酸新霉素的基礎(chǔ)日糧，并分別在0D，8D，23D和45D四個(gè)階段取其直腸內(nèi)容物。B組從斷奶后飼喂基礎(chǔ)日糧，并在3月齡時(shí)屠宰取各腸段腸道內(nèi)容物。對(duì)A、B兩組樣品進(jìn)行高通量測(cè)序分析。同時(shí)，對(duì)腸道微

2、生物進(jìn)行neo基因漂移檢測(cè)，多重PCR結(jié)果表明，外源基因neo沒(méi)有水平漂移到微生物基因組中。
　　A組數(shù)據(jù)表明，neo基因的表達(dá)產(chǎn)物NPTⅡ蛋白對(duì)腸道微生物的耐藥性有一定的影響。NPTⅡ蛋白主要來(lái)自于死亡和脫落的上皮細(xì)胞以及相關(guān)的微生物。我們通過(guò)對(duì)轉(zhuǎn)基因豬和陰性豬飼喂硫酸新霉素前后不同時(shí)間點(diǎn)，在門和屬水平上的檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，低水平的NPTⅡ蛋白能夠中和一定量的硫酸新霉素，盡管其具體的機(jī)制我們還不清楚。因此，在一定程度上，可以得出以下結(jié)論

3、:轉(zhuǎn)基因豬由于neo基因的表達(dá)對(duì)腸道微生物的耐藥性產(chǎn)生了影響。
　　通過(guò)對(duì)B組陰性豬和轉(zhuǎn)基因豬各相同腸段中菌群分布的比較分析，發(fā)現(xiàn)陰性豬與轉(zhuǎn)基因豬在門和屬水平上總體差異不大，但還是在某些門和屬上，甚至是某些主要門和屬上出現(xiàn)了非期望效應(yīng)。在門和屬水平上，通過(guò)對(duì)A組1.5月齡和B組3月齡陰性豬與轉(zhuǎn)基因豬之間的菌群動(dòng)態(tài)變化比較分析中，發(fā)現(xiàn)隨著時(shí)間的推移，陰性豬與轉(zhuǎn)基因豬主要菌群分布比例出現(xiàn)相反的變化趨勢(shì)，產(chǎn)生了非期望效應(yīng)。上訴轉(zhuǎn)基因豬和

4、陰性豬中的細(xì)菌在門和屬水平上的變化表明，低水平的NPTⅡ蛋白對(duì)轉(zhuǎn)基因豬腸道菌群產(chǎn)生非期望效應(yīng)，其機(jī)制有待進(jìn)一步研究。
　　總之，本文的研究表明，外源基因neo的表達(dá)在一定程度上可提高轉(zhuǎn)基因豬的耐藥性，可導(dǎo)致轉(zhuǎn)基因豬腸道微生物某些菌群產(chǎn)生非期望效應(yīng)，同時(shí)也可能會(huì)對(duì)轉(zhuǎn)基因豬的健康產(chǎn)生一定的影響。此研究為我們?cè)谵D(zhuǎn)基因研究尤其是轉(zhuǎn)基因產(chǎn)業(yè)化開(kāi)發(fā)中慎用neo基因提供了科學(xué)的警示，同時(shí)此研究通過(guò)利用高通量測(cè)序技術(shù)也為豬的各腸段微生物在時(shí)間和空