雷帕霉素對(duì)轉(zhuǎn)基因絨山羊細(xì)胞中外源基因表達(dá)的影響.pdf

1、雷帕霉素（rapamycin），又稱西莫羅斯，屬大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，在南太平洋復(fù)活節(jié)島(Easter Island，Rapa Nui)的吸水鏈霉菌（Streptomyces hygroscopicusAY B-994）代謝產(chǎn)物中獲得，起初被作為抗真菌藥物使用，后發(fā)現(xiàn)其具有強(qiáng)烈的免疫抑制作用而被用于治療器官移植的排斥反應(yīng)。mTOR(mammalian target ofrapamycin)是雷帕霉素在哺乳動(dòng)物中的靶蛋白，以mTORC1(ma

2、mmalian target ofrapamycin complex1)和mTORC2(mammalian target of rapamycin complex2)兩種蛋白質(zhì)復(fù)合體的形式存在，其中mTORC1對(duì)雷帕霉素敏感，而mTORC2對(duì)其不敏感，雷帕霉素是mTORC1的特異性抑制劑。mTOC1通過(guò)下游效應(yīng)蛋白4E-BP1和S6K1調(diào)控細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)合成，也參與基因轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控。盡管對(duì)于mTOR信號(hào)通路功能的研究已較為深刻，但其對(duì)轉(zhuǎn)

3、基因細(xì)胞系中外源基因表達(dá)的作用尚無(wú)報(bào)道。
　　本實(shí)驗(yàn)首先利用PCR技術(shù)克隆了人Keratin5啟動(dòng)子，并通過(guò)構(gòu)建啟動(dòng)子功能驗(yàn)證載體pK5-DsRed2-1，轉(zhuǎn)染絨山羊細(xì)胞，驗(yàn)證人Keratin5啟動(dòng)子的功能;其次，通過(guò)克隆絨山羊IGF-1基因，并連接到人Keratin5啟動(dòng)子下游，構(gòu)建皮膚特異性表達(dá)載體pCDsRed-KI，轉(zhuǎn)染細(xì)胞，構(gòu)建轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系;最后，利用雷帕霉素處理轉(zhuǎn)基因細(xì)胞，RT-PCR檢測(cè)外源基因表達(dá)。結(jié)果顯示:1）人