健康人腸道大腸埃希菌耐藥性及其耐藥基因播散機(jī)制的研究.pdf

1、目的 測定北京地區(qū)健康人腸道大腸埃希菌耐藥水平和特征；研究整合子和耐藥基因盒在健康人群腸道大腸埃希菌中攜帶情況及分布特點(diǎn)，探討耐藥基因盒與細(xì)菌耐藥表型的關(guān)系；了解整合子在不同基因型菌株中的分布，以及整合子在耐藥性水平傳遞中的作用和分子機(jī)制。 方法 利用全自動(dòng)細(xì)菌鑒定／藥敏分析儀，對從健康人腸道分離的150株大腸埃希菌進(jìn)行鑒定，14種抗生素敏感性測定和產(chǎn)ESBLs判讀，另外7種抗生素用紙片擴(kuò)散法進(jìn)行敏感性測定；對兩

2、種藥物敏感性方法進(jìn)行平行實(shí)驗(yàn)比較結(jié)果符合率；采用PCR方法檢測細(xì)菌攜帶Ⅰ、Ⅱ類整合子的情況，通過限制性內(nèi)切酶分析，純化測序，將不同大?、耦愓献拥腄NA序列在GeneBank中搜索，確定其可變區(qū)基因盒的種類；利用脈沖場凝膠電泳(PFGE)對大腸埃希菌進(jìn)行分子分型；通過質(zhì)粒接合試驗(yàn)研究Ⅰ類整合子水平傳遞現(xiàn)象，并聯(lián)合斑點(diǎn)雜交試驗(yàn)對I類整合子進(jìn)行定位分析。 結(jié)果 150株健康人腸道大腸埃希菌對常用抗生素存在耐藥性，耐藥率高的

3、 抗生素包括四環(huán)素(63.3％)、萘啶酸(58.0％)、甲氧芐啶(49.3％)、磺 胺(46.0％)、氨芐西林(43.3％)；5株(3.3％)細(xì)菌產(chǎn)ESBLs，83株(55.3％) 細(xì)菌為多重耐藥菌(耐受3種以上抗生素)；全部菌株對亞胺培南，頭孢 吡肟與頭孢替坦敏感；兩種藥物敏感性鑒定方法結(jié)果符合率較高。檢出Ⅰ 類整合子陽性菌株42株(28.0％)，大小為150bp～3000bp共8種條帶， 其中1株細(xì)菌含有兩個(gè)Ⅰ類整合子(1

4、 000bp 1700bp)，未檢測到Ⅱ類 整合酶。大小相同的Ⅰ類整合子酶切圖譜一致，據(jù)此認(rèn)為它們有相同序列。 整合子中最常見的基因盒為dfrl7(甲氧芐啶耐藥基因)、aadA5(鏈霉素 一壯觀霉素耐藥基因)，最主要的基因盒排列為dfrl7-aadA5。攜帶甲氧芐 啶耐藥基因盒的菌株只有Ⅰ株對復(fù)方新諾明敏感，攜帶鏈霉素—壯觀霉素 耐藥基因盒的大多數(shù)菌株對鏈霉素耐受。細(xì)菌多重耐藥率與整合子攜帶情況與年齡不相關(guān)。 在PF

5、GE分型的40株大腸埃希菌中，只有菌株145和96、菌株T7和71的同源性系數(shù)達(dá)到90.0％以上為同—基因型，其余菌株均為不同基因型，Ⅰ類整合子可存在于同種或不同基因型菌株中。在質(zhì)粒接合試驗(yàn)中，有25(59.5％)株菌將Ⅰ類整合子成功傳遞給受體菌，耐藥表形也相應(yīng)傳遞，證明耐藥質(zhì)粒含有Ⅰ類整合子。據(jù)斑點(diǎn)雜交實(shí)驗(yàn)結(jié)果，位于染色體和非接合性質(zhì)粒的整合子分別為8株和9株。 結(jié)論 北京地區(qū)健康人腸道大腸埃希菌耐藥情況比較嚴(yán)重，細(xì)菌

6、多重耐藥率和Ⅰ類整合子的存在密切相關(guān)，與年齡分布沒有關(guān)聯(lián)。菌株攜帶基因盒和耐藥表型之間有較好的對應(yīng)關(guān)系，耐藥基因盒種類與抗生素使用的時(shí)間與廣度有關(guān)。整合子一基因盒介導(dǎo)細(xì)菌耐藥性，基因分型與質(zhì)粒接合試驗(yàn)證明整合子可在細(xì)菌種內(nèi)進(jìn)行水平傳播。首次獲得整合子一基因盒在健康人大腸埃希菌中的分子流行病學(xué)資料，為合理解釋臨床致病菌與食源性致病菌多重耐藥性的快速擴(kuò)散提供理論支持。進(jìn)一步探討整合子介導(dǎo)和傳播細(xì)菌耐藥性的分子機(jī)制，豐富補(bǔ)充整合子一基因盒體系