白芍有效成分芍藥苷的UPLC法測(cè)定及其對(duì)膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎大鼠的影響.pdf

1、目的:
　　采用超高效液相色譜法對(duì)白芍有效成分芍藥苷的定量測(cè)定及白芍煎劑灌胃SD大鼠后吸收入血成分的定性測(cè)定，探討吸收入血成分對(duì)膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎(CIA)大鼠的治療作用，尋找痹腫消湯治療RA的有效單體。
　　方法:
　　1.采用超高效液相色譜法測(cè)定白芍有效成分芍藥苷含量，色譜柱:(ACQUITY UPLC BEH C182.1×50mm Column,1.7μm)，流動(dòng)相:乙腈(A)和1％醋酸水(B)，梯度洗脫，流速:

2、0.25mL/min，柱溫:40℃，檢測(cè)波長(zhǎng):190-480nm。繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并對(duì)其精密度、回收率、樣本穩(wěn)定性和重復(fù)性進(jìn)行驗(yàn)證。
　　2.運(yùn)用上述超高效液相色譜法對(duì)SD大鼠灌胃白芍煎劑后血漿中有效成分進(jìn)行定性檢測(cè)。
　　3.采用牛Ⅱ型膠原混合弗氏佐劑誘導(dǎo)SD大鼠復(fù)制CIA動(dòng)物模型，以芍藥苷標(biāo)準(zhǔn)品灌胃給藥干預(yù)，通過(guò)其對(duì)與RA發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)的血清炎性細(xì)胞因子IL-1β、TNF-α含量的影響，從低、中、高劑量中篩選出芍藥苷治療

3、膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎大鼠的最佳劑量，并對(duì)大鼠一般情況、體重增長(zhǎng)變化、關(guān)節(jié)炎指數(shù)積分、足爪腫脹度、足爪影像學(xué)、關(guān)節(jié)滑膜病理學(xué)及血清IL-1β、TNF-α含量變化進(jìn)行評(píng)估，探討芍藥苷對(duì)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎模型的治療作用。
　　結(jié)果:
　　1.在5min內(nèi)，白芍有效成分芍藥苷獲得良好分離，測(cè)得白芍生藥中芍藥苷含量為0.73mg/g。芍藥苷在其檢測(cè)范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，R2＞0.9993;日內(nèi)、日間精密度良好，其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差(RSD)波動(dòng)在0.9

4、8％-3.65％之間;白芍煎劑在24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定性良好，RSD＜2.64％;白芍煎劑重復(fù)性良好，RSD＜2.68％;芍藥苷的加樣回收率良好，加樣回收率在98.5％-103.5％之間，RSD＜2.7％。
　　2.灌胃白芍煎劑30min后，在SD大鼠血漿中成功檢測(cè)出活性物質(zhì)芍藥苷。
　　3.低、中、高不同劑量的芍藥苷能不同程度地下調(diào)CIA大鼠血清IL-1β、TNF-α水平，中劑量效果更明顯。
　　4.以中劑量芍藥苷干預(yù)CIA

5、大鼠:①一般情況觀察:模型組大鼠精神委靡，飲食、活動(dòng)減少，后期可見毛發(fā)枯燥等癥狀;治療組、正常組大鼠未見以上表現(xiàn)。②體重增長(zhǎng)變化情況:模型組、治療組大鼠較正常組大鼠體重增長(zhǎng)緩慢;治療3周后，治療組大鼠與模型組大鼠比較體重增長(zhǎng)明顯(P＜0.01)。③關(guān)節(jié)炎指數(shù)評(píng)分:隨著病程延長(zhǎng)，模型組、治療組大鼠關(guān)節(jié)炎指數(shù)積分逐漸增加，在第21天左右達(dá)到高峰;在第35天、42天時(shí)，治療組大鼠關(guān)節(jié)炎指數(shù)明顯低于模型組(P＜0.05)。④足爪腫脹度測(cè)量:模型

6、組大鼠足爪腫脹較正常組腫脹明顯(P＜0.05)，隨著病程延長(zhǎng)，足爪腫脹度逐漸升高;治療2周后，治療組大鼠足爪腫脹度與模型組比較明顯減輕(P＜0.05)。⑤關(guān)節(jié)X線攝片觀察:免疫后14天左右，模型組大鼠踝關(guān)節(jié)軟組織腫脹明顯，隨著病程延長(zhǎng)，出現(xiàn)足趾關(guān)節(jié)骨密度降低、明顯骨侵蝕病灶、關(guān)節(jié)間隙狹窄甚至消失等表現(xiàn)。治療4周后，治療組大鼠關(guān)節(jié)周圍組織腫脹程度明顯減輕，骨質(zhì)破壞程度不明顯。⑥滑膜病理學(xué)觀察:免疫后42天，模型組大鼠滑膜可見大量血管翳形成

7、、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、滑膜增厚等病理特征;治療4周后，治療組可見少量新生血管及炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，滑膜輕度增厚。⑦血清IL-1β、TNF-α水平檢測(cè):在第28天、42天時(shí)，模型組、治療組大鼠血清IL-1β、TNF-α水平較正常組明顯升高(P＜0.01)，但治療組大鼠血清IL-1β、TNF-α水平明顯低于模型組(P＜0.01)。
　　結(jié)論:
　　1.建立了白芍有效成分芍藥苷經(jīng)胃吸收入血的UPLC檢測(cè)法。
　　2.低、中、高不同劑量的