99Tc-MDP對膠原誘導性關節(jié)炎大鼠PANKL-OPG系統(tǒng)的影響.pdf

1、目的:
　　 建立膠原誘導性關節(jié)炎(collagen—induced arthritis,CIA)大鼠模型,通過檢測給藥前后血清和膝關節(jié)液核因子κB受體活化因子配體(recepter activator ofnuclear factor-κB ligand,RANKL)、骨保護素(osteoprotegerin,OPG)濃度,以及RANKL、OPG在膝關節(jié)滑膜組織的表達,研究RANKL／OPG系統(tǒng)在CIA大鼠關節(jié)病變發(fā)生發(fā)展中的

2、作用。以空白組和模型組作對照,研究甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)和99锝[99Tc]-亞甲基二膦酸鹽(Technetium-99 tertiarydiphosphine,99Tc-MDP,商品名:云克)對CIA大鼠血清、膝關節(jié)液RANKL、OPG濃度和膝關節(jié)滑膜RANKL和OPG表達的影響,探討MTX和99Tc-MDP的干預作用。
　　 方法:
　　 48只雄性Wistar大鼠隨機選取8只作為空白組,其余4

3、0只用于造模。造模大鼠自尾根部至背部皮下多點注射雞Ⅱ型膠原乳劑(0.5ml／只),一周后等量加強免疫；空白組皮下注射等量生理鹽水作對照。初次免疫后第28天進行關節(jié)炎指數(shù)(arthritis index,AI)評分,選取24只AI評分≥6分大鼠隨機分為模型組、MTX組和99Tc-MDP組,每組8只。MTX組:尾靜脈注射MTX(2.4mg／(kg·w)),持續(xù)3周,給藥間歇內每天尾靜脈注射等體積生理鹽水；99Tc-MDP組:尾靜脈注射99T

4、c-MDP(含99锝0.04μg／(kg·d)),持續(xù)3周;空白組及模型組每日尾靜脈注射同99Tc-MDP組等體積生理鹽水作對照,持續(xù)3周。給藥前及給藥后每周進行一次AI評分及尾靜脈取血,給藥結束后留取左后肢膝關節(jié)液,采用酶聯(lián)免疫吸附(enzyme linkedimmunosorbent assay,ELISA)法測定大鼠血清及膝關節(jié)液RANKL、OPG濃度；留取右后肢膝關節(jié),脫鈣后行蘇木素-伊紅(HE)染色,觀察膝關節(jié)滑膜、軟骨和骨病

5、理變化并計算病理評分,行免疫組織化學染色檢測膝關節(jié)滑膜RANKL和
　　 OPG表達；留取左后肢膝關節(jié)滑膜,蛋白免疫印跡(Western blot)法檢測滑膜RANKL、OPG表達。所有實驗數(shù)據均以(x)±s形式表示,用SPSS18.0軟件進行正態(tài)性檢驗,組間比較采用采用t檢驗,P<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。
　　 結果:
　　 1)40只大鼠用于造模,造模成功24只,成功率60％。
　　 2)給藥后

6、,MTX組和99Tc-MDP組關節(jié)炎指數(shù)明顯低于模型組(P<0.01),99Tc-MDP組明顯低于MTX組(P<0.01)。模型組和MTX組給藥后3周明顯高于給藥前(P<0.01)；99Tc-MDP組給藥后1周明顯低于給藥前(P<0.01)。
　　 3)給藥后MTX組和99Tc-MDP組大鼠血清RANKL、OPG濃度及比值明顯低于模型組(P<0.01),99Tc-MDP組明顯低于MTX組(P<0.01)?？瞻捉M給藥前后未見明顯變

7、化(P>0.05)；模型組和MTX組給藥后3周明顯高于給藥前(P<0.01)；99Tc-MDP組給藥后1周明顯低于給藥前(P<0.01)。
　　 4)給藥結束后,模型組、MTX組和99Tc-MDP組膝關節(jié)液RANKL、OPG濃度及RANKL／OPG比值明顯高于空白組(P<0.01)；MTX組和99Tc-MDP組明顯低于模型組(P<0.01)；99Tc-MDP組明顯低于MTX組(P<0.01)。
　　 5)99Tc-MDP

8、組和MTX組膝關節(jié)病理評分明顯低于模型組(P<0.01)；99Tc-MDP組明顯低于MTX組(P<0.01)。
　　 6)模型組、MTX組和99Tc-MDP組膝關節(jié)滑膜RANKL、OPG表達以及二者半定量比值明顯高于空白組(P<0.01),MTX組和99Tc-MDP組明顯低于模型組(P<0.01),99Tc-MDP組明顯低于MTX組(P<0.01)。
　　 結論:
　　 1.應用完全弗氏佐劑乳化的雞Ⅱ型膠原乳劑可

9、成功誘導CIA大鼠模型。
　　 2.CIA大鼠血清和膝關節(jié)液RANKL、OPG濃度明顯升高,膝關節(jié)滑膜RANKL、OPG表達明顯增強,提示RANKL和OPG可能參與了CIA大鼠病變的發(fā)生發(fā)展,RANKL／OPG比值升高可能是CIA大鼠關節(jié)發(fā)生破壞的機制之一。
　　 3.MTX和99Tc-MDP均可降低血清及膝關節(jié)液RANKL和OPG濃度、抑制膝關節(jié)滑膜RANKL和OPG表達,提示二者可能通過降低RANKL／OPG比值達到

10、改善關節(jié)滑膜炎癥、軟骨和骨質破壞的作用。
　　 4.99Tc—MDP組大鼠血清和膝關節(jié)液RANKL、OPG濃度及膝關節(jié)滑膜RANKL、OPG表達半定量結果明顯低于MTX組,結合關節(jié)炎指數(shù)和膝關節(jié)病理評分,認為本實驗周期內99Tc-MDP組療效優(yōu)于MTX組。
　　 5.99Tc-MDP組關節(jié)炎指數(shù)和血清RANKL、OPG濃度于給藥后1周開始低于給藥前,MTX組給藥后3周仍高于給藥前,提示本實驗周期內99Tc-MDP組起效時