人乳腺癌組織資源庫(kù)的初步構(gòu)建.pdf

1、目的:乳腺癌(breast cancer)是威脅婦女健康的主要惡性腫瘤,全球每年大約有一百萬(wàn)婦女患病,我國(guó)乳腺癌的發(fā)病率一直居女性腫瘤的首位,并且發(fā)病年齡年輕化、發(fā)病率呈逐年遞增的趨勢(shì),成為城市中死亡率增長(zhǎng)最快的癌癥。隨著對(duì)乳腺癌分子生物學(xué)的廣泛研究,對(duì)乳腺癌組織標(biāo)本的需求日益增長(zhǎng)。以往研究者通常是根據(jù)某個(gè)研究課題的需要,進(jìn)行臨時(shí)的腫瘤標(biāo)本收集,使得大量的有價(jià)值的腫瘤標(biāo)本和相關(guān)資料流失,給腫瘤的深入研究帶來(lái)極大的損失。本課題擬建立人乳腺

2、癌組織資源庫(kù),收集、保存乳腺癌組織標(biāo)本,匯總病人各類(lèi)信息和數(shù)據(jù),為廣大的醫(yī)學(xué)科研人員開(kāi)展乳腺癌臨床和基礎(chǔ)研究提供重要的信息平臺(tái)。
　　 方法:(1)運(yùn)用Windows2000系統(tǒng)制定出人乳腺癌組織資源庫(kù)構(gòu)建的操作流程及各個(gè)技術(shù)環(huán)節(jié)的標(biāo)準(zhǔn)操作程序(Standard Operation Procedure,SOP),為建立規(guī)范化、標(biāo)準(zhǔn)化的腫瘤組織庫(kù)奠定科學(xué)的基礎(chǔ)。(2)由病理醫(yī)生對(duì)手術(shù)后乳腺癌組織進(jìn)行診斷用常規(guī)取材,通過(guò)對(duì)組織進(jìn)行固

3、定、包埋、切片、制成蠟塊,常規(guī)蘇木素.伊紅(hematoxylin and eosin,HE)染色和免疫組織化學(xué)染色,對(duì)乳腺癌幾個(gè)特異性生化指標(biāo)包括雌激素受體(estrogen receptor,ER)、孕激素受體(progesterone receptor,PR)、CerbB-2／HER2進(jìn)行判斷,建立石蠟包埋的乳腺癌組織庫(kù)。(3)病理醫(yī)生常規(guī)取材后,余下的新鮮腫瘤組織切成0.5cm3左右的小塊,分裝于不同的凍存管中,作好標(biāo)記后放置于

4、-80℃凍存。其中取一部分組織按照制定的標(biāo)準(zhǔn)化操作程序,進(jìn)行DNA、RNA及蛋白質(zhì)的提取,并分別對(duì)其進(jìn)行質(zhì)量檢測(cè),再作好記錄及標(biāo)記后凍存,由此建立新鮮乳腺癌組織庫(kù)和乳腺癌生物分子數(shù)據(jù)庫(kù)。(4)采集病人抗凝血5ml,3000g離心3min后,分別收集血清及血細(xì)胞,同時(shí)進(jìn)行質(zhì)量檢測(cè),作好標(biāo)記后凍存于-80℃低溫冰箱。(5)運(yùn)用Windows2000系統(tǒng),設(shè)計(jì)各項(xiàng)Excel信息表格,收集病人各種基本信息(包括臨床、病理信息)和隨訪(fǎng)信息,建立乳

5、腺癌信息數(shù)據(jù)庫(kù),便于研究者查詢(xún),為臨床治療提供支持；同時(shí)設(shè)計(jì)了《婦女乳腺健康調(diào)查表》,通過(guò)收集乳腺癌患者的個(gè)人史和既往史等相關(guān)信息,方便今后流行病學(xué)調(diào)查取證。
　　 結(jié)果:(1)制定了乳腺癌組織資源庫(kù)的操作流程圖,組織樣本采集SOP、條碼標(biāo)簽設(shè)定規(guī)范、DNA、RNA、蛋白質(zhì)提取的SOP,以及血液樣本采集的SOP；(2)病理組織常規(guī)HE染色顯示所取組織為乳腺癌組織,免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示ER、PR陽(yáng)性定位于細(xì)胞核,CerbB-2

6、／HER2陽(yáng)性定位于細(xì)胞膜,三者均為黃色、棕黃色、黃褐色顆粒,陽(yáng)性率視病人不同而不同；(3)乳腺癌組織所提取DNA的OD260／OD280比值均在1.8-2.0之間,所提取RNA的瓊脂糖凝膠電泳圖譜顯示18s和28s兩條帶,其中28s條帶的亮度是18s的1.5-2倍,表明凍存的新鮮乳腺癌組織各種生物分子完整未降解,質(zhì)量較好,適用于各種研究；(4)乳腺癌患者血液提取DNA的OD260／OD280比值均在1.8-2.0之間,血清蛋白SDS-

7、聚丙烯酰胺凝膠電泳圖譜顯示蛋白條帶清晰,表明凍存的血液標(biāo)本質(zhì)量較好,可作為科學(xué)研究樣本；(5)制定了各項(xiàng)Excel信息表格和《婦女乳腺健康調(diào)查表》,有利于規(guī)范化采集與匯總病人病理、臨床及基礎(chǔ)方面的各類(lèi)信息,為今后進(jìn)行乳腺癌的基礎(chǔ)與臨床研究,進(jìn)行大規(guī)模流行病學(xué)篩查提供可靠的數(shù)據(jù)支持。
　　 結(jié)論:初步構(gòu)建了人乳腺癌組織資源庫(kù)的建設(shè)框架,包括:石蠟包埋的乳腺癌組織庫(kù)、新鮮乳腺癌組織庫(kù)、乳腺癌生物分子數(shù)據(jù)庫(kù)、乳腺癌信息數(shù)據(jù)庫(kù)。目前已收