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文檔簡介
1、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemiclupuserythematosus,SLE)是一個潛在的致死性疾病,以出現(xiàn)各種典型的自身免疫癥狀包括自身免疫反應(yīng)、血管炎、關(guān)節(jié)炎和腎小球腎炎等為特征。在美國SLE病人總數(shù)已經(jīng)超過二十五萬,90%發(fā)生于育齡期婦女,嚴(yán)重影響人類健康。隨著治療手段的進(jìn)步,狼瘡性腎炎病人5年的生存率從二十世紀(jì)五十年代的44%提高到現(xiàn)在的82%,但是SLE病人的平均壽命只有44歲。SLE以其復(fù)雜多變的癥狀引起臨床工作者的廣泛關(guān)注
2、,而SLE幾乎累及免疫系統(tǒng)的各個成份,更是引起了免疫學(xué)工作者極大的興趣,針對SLE的發(fā)病機(jī)制和SLE防治方法的研究一直是科學(xué)家關(guān)注的重大前沿課題。
作為SLE病人血清學(xué)特征的抗雙鏈DNA(double-strandedDNA,dsDNA)抗體,已經(jīng)被證明是致病性的,可以引起免疫復(fù)合物沉積和組織損傷,與SLE疾病的嚴(yán)重程度密切相關(guān)。SLE病人遺傳學(xué)的研究發(fā)現(xiàn)抗dsDNA自身抗體大多屬于對dsDNA具有高親和力的IgG亞類,不同于
3、體細(xì)胞突變產(chǎn)生的抗體。研究顯示自身DNA可以誘導(dǎo)抗dsDNA抗體產(chǎn)生。一般情況下,哺乳動物的DNA免疫原性較弱,不會引起免疫應(yīng)答。尋找引起自身免疫反應(yīng)和抗dsDNA抗體產(chǎn)生的驅(qū)動成份是免疫學(xué)家關(guān)注的熱點。我們實驗室在尋找SLE驅(qū)動原的過程中發(fā)現(xiàn)用活化淋巴細(xì)胞來源的DNA(activatedlymphocyte-derivedDNA,ALD-DNA)免疫同系的雌性BALB/c小鼠,可以產(chǎn)生一系列的SLE癥狀,包括高水平的抗dsDNA自身抗
4、體、蛋白尿、免疫復(fù)合物沉積和腎小球腎炎,這些癥狀模擬病人體內(nèi)由大量凋亡細(xì)胞來源的自身DNA引起的SLE癥狀,因此ALD-DNA免疫的小鼠可以被作為理想的小鼠狼瘡模型進(jìn)行探討SLE疾病可能的細(xì)胞與分子免疫學(xué)機(jī)制。
SLE通常被認(rèn)為是由自身抗體介導(dǎo)的全身性炎癥反應(yīng)和由T/B細(xì)胞介導(dǎo)的適應(yīng)性免疫應(yīng)答所誘發(fā)的組織損傷,但是SLE發(fā)病和疾病進(jìn)展的細(xì)胞與分子機(jī)制仍不清楚。有研究提示,在SLE小鼠中,顯著激活的巨噬細(xì)胞和其它髓系細(xì)胞大量浸潤
5、到淋巴組織和腎臟中,啟動和促進(jìn)適應(yīng)性免疫應(yīng)答,從而導(dǎo)致SLE的發(fā)生。越來越多的證據(jù)顯示F4/80+巨噬細(xì)胞是SLE腎炎中主要的浸潤細(xì)胞,在SLE腎炎的發(fā)生過程中扮演重要角色,而浸潤的巨噬細(xì)胞發(fā)揮保護(hù)性還是病理性作用有待闡明。功能上的可塑性和多樣性是單核巨噬細(xì)胞的顯著特點之一,巨噬細(xì)胞隨著周圍環(huán)境的變化,功能上會發(fā)生顯著變化,這些功能上的變化,也稱為功能上的巨噬細(xì)胞極化,可以產(chǎn)生有不同基因表達(dá)譜和不同功能的巨噬細(xì)胞亞群。目前認(rèn)為M1和M2
6、(包括M2a、M2b和M2c)是單核巨噬細(xì)胞功能上連續(xù)變化過程的兩個極端。在SLE疾病過程中巨噬細(xì)胞是否發(fā)生極化、極化類型及其機(jī)制鮮有報道。
本研究的目的在于:(1)探討巨噬細(xì)胞在ALD-DNA誘導(dǎo)SLE發(fā)病中的作用;(2)通過表型分析和細(xì)胞因子表達(dá)譜鑒定,分析SLE模型鼠腎炎組織中巨噬細(xì)胞的活化和極化類型以及可能的分子機(jī)制;(3)研究導(dǎo)致自身DNA清除障礙和打破免疫耐受引起巨噬細(xì)胞產(chǎn)生免疫應(yīng)答的機(jī)制;(4)設(shè)計體內(nèi)外實驗探索
7、SLE疾病可能的防治方法。我們的研究分為以下四部分:
1.巨噬細(xì)胞在ALD-DNA誘導(dǎo)SLE發(fā)病中的作用
體內(nèi)未被清除的凋亡細(xì)胞來源的自身DNA具有免疫原性,可以引發(fā)一系列的免疫應(yīng)答,從而導(dǎo)致抗自身DNA的抗體產(chǎn)生和抗體介導(dǎo)的組織損傷,這在SLE病人體內(nèi)非常普遍,但是巨噬細(xì)胞是否在SLE發(fā)病過程中發(fā)揮作用仍不清楚。在本課題中,我們在ALD-DNA免疫的SLE小鼠模型中,發(fā)現(xiàn)狼瘡腎炎組織中有大量的活化巨噬細(xì)胞浸潤。AL
8、D-DNA可以在體內(nèi)和體外誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞分泌細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10,并上調(diào)表達(dá)表面活化標(biāo)志包括MHCclass-Ⅱ、CD40、CD80和CD86,但是非活化淋巴細(xì)胞來源的DNA(unactivatedlymphocyte-derivedDNA,UnALD-DNA)并不能引起巨噬細(xì)胞的活化。我們進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)活化的巨噬細(xì)胞在體外可以促進(jìn)T分泌IL-4和IL-10,促進(jìn)B細(xì)胞產(chǎn)生抗dsDNA的自身抗體,從而參與ALD
9、-DNA誘導(dǎo)的自身免疫反應(yīng)。更重要的是去除SLE模型小鼠體內(nèi)的巨噬細(xì)胞可以有效減輕尿蛋白水平、緩解狼瘡性腎炎的癥狀。這些研究結(jié)果提示巨噬細(xì)胞在SLE發(fā)病過程中扮演重要角色,ALD-DNA通過誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞活化進(jìn)而啟動針對自身抗原的固有免疫和適應(yīng)性免疫應(yīng)答,從而造成免疫復(fù)合物沉積和組織損傷。以上發(fā)現(xiàn)為SLE的發(fā)病機(jī)制提供了新視野,為臨床SLE疾病的治療提供了以控制巨噬細(xì)胞浸潤和活化作為靶點的可能的新治療策略。
2.ALD-DNA誘
10、導(dǎo)巨噬細(xì)胞極化的Notch途徑
在SLE病人體內(nèi)存在固有免疫應(yīng)答失調(diào),包括異常巨噬細(xì)胞的活化?;罨木奘杉?xì)胞會發(fā)生功能上極化,但是在SLE疾病過程中活化巨噬細(xì)胞的極化類型和機(jī)制并不清楚。作為一個重要的決定細(xì)胞命運的局部細(xì)胞相互作用機(jī)制,Notch信號通路在調(diào)控各種免疫細(xì)胞的發(fā)育和分化過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用,但是Notch通路是否在巨噬細(xì)胞極化過程中發(fā)揮作用并不清楚。本研究中,我們課題組用ALD-DNA免疫小鼠,建立了SLE模型。在
11、SLE模型鼠中,我們發(fā)現(xiàn)狼瘡腎炎組織中有M2b巨噬細(xì)胞的浸潤。在體內(nèi)M2b巨噬細(xì)胞以及體外ALD-DNA誘導(dǎo)的M2b巨噬細(xì)胞中,我們發(fā)現(xiàn)Notchl信號通路的活性增加。通過抑制Notchl信號通路以及高表達(dá)Notchl胞內(nèi)活性片段的方法,我們發(fā)現(xiàn)ALD-DNA誘導(dǎo)的M2b極化依賴于Notchl信號通路的活化。Notchl信號通路活化后通過激活P13K和MAPK信號通路促進(jìn)NF-κBp50入核從而驅(qū)動ALD-DNA誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞M2b極化
12、。進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)用Notch信號通路抑制劑γ-分泌酶抑制劑(γ-secretaseinhibitor,GSI)處理小鼠,可以通過鈍化巨噬細(xì)胞M2b極化從而緩解SLE癥狀。我們的研究結(jié)果顯示Notchl途徑依賴的巨噬細(xì)胞M2b極化可能在SLE疾病中發(fā)揮重要作用,提示阻斷Notchl信號通路可以作為SLE的潛在治療方法。
3.Jaggedl參與巨噬細(xì)胞M2極化的Notch途徑
巨噬細(xì)胞被微環(huán)境中不同的誘導(dǎo)因素活化后表現(xiàn)出不同
13、的表型和功能特征,導(dǎo)致巨噬細(xì)胞極化為M1或者M(jìn)2型巨噬細(xì)胞。雖然這些巨噬細(xì)胞亞群的分化和功能已經(jīng)研究清楚,但是對于決定巨噬細(xì)胞極化事件的因素中除了可溶性的細(xì)胞因子(例如IFN-γ或者IL-4)之外的細(xì)胞表面受體的作用知之甚少。在本研究中我們提供直接證據(jù)表明Jaggedl和巨噬細(xì)胞表面的受體Notchl相互作用后傳導(dǎo)信號,促進(jìn)巨噬細(xì)胞發(fā)生M2極化。Jaggedl-Notchl信號通路的活化和效應(yīng)細(xì)胞分化有劑量依賴關(guān)系,高水平的Jagged
14、l刺激Notch1信號通路會導(dǎo)致巨噬細(xì)胞M2活化標(biāo)志顯著增加。我們的研究結(jié)果提示Jaggedl活化的Notchl信號通路決定巨噬細(xì)胞M2極化而不發(fā)生M1極化,同時也提供一個巨噬細(xì)胞M2類型極化的可能機(jī)制。
4.SAP通過誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞極化類型轉(zhuǎn)換緩解SLE發(fā)病
作為正常存在的DNA結(jié)合蛋白,血清淀粉狀蛋白P成份(SerumamyloidPcomponent,SAP)可以激活巨噬細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞核成份包括dsDNA的吞噬。
15、在我們前期研究中發(fā)現(xiàn),ALD-DNA免疫小鼠可以誘導(dǎo)SLE的發(fā)生,有理由推測SAP在SLE疾病過程中發(fā)揮重要作用。在本課題中,我們發(fā)現(xiàn)ALD-DNA免疫的SLE小鼠血清中輕微升高的SAP濃度伴隨著DNA濃度顯著升高,導(dǎo)致SLE小鼠血清中SAP濃度與DNA濃度的比值顯著低于正常小鼠,而且其比值和SLE小鼠血清中抗dsDNA的水平成負(fù)相關(guān)。進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)SAP可以和DNA結(jié)合從而促進(jìn)巨噬細(xì)胞介導(dǎo)的DNA吞噬。在體外,SAP和DNA結(jié)合后可
16、以使巨噬細(xì)胞極化類型從DNA誘導(dǎo)type-Ⅱ型(M2b)轉(zhuǎn)為SAP-DNA復(fù)合物誘導(dǎo)的替代性途徑活化類型(alternativelyactivatedmacrophages,AAMφs;M2a)。AAMφs分泌大量的細(xì)胞因子IL-10一方面可以阻止DNA誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞type-Ⅱ活化,另一方面可以促進(jìn)AAMφs對DNA的吞噬。更為重要的是我們用SAP處理小鼠,增加SLE小鼠體內(nèi)的SAP水平,通過誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞極化為AAMφs,從而緩解腎小球
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