幾種中藥抗癌活性成分的分離鑒定及其誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的機(jī)制研究.pdf

1、天然產(chǎn)物是新藥開發(fā)研究的重要源泉，中草藥是我國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)藥發(fā)展的重要寶藏。系統(tǒng)地挖掘和整理中草藥中的活性物質(zhì)，是我國(guó)中藥現(xiàn)代化的必由之路。本文選擇了3種使用頻率較高的抗癌中藥—栝樓、穿心蓮及白花蛇舌草，運(yùn)用體外抗腫瘤模型解析和鑒定了3種抗腫瘤活性最為突出的單體化合物。對(duì)于腫瘤的治療，本文分別從單體化合物抑制腫瘤增殖、聯(lián)合用藥提升抗腫瘤療效及對(duì)耐藥性腫瘤的治療三方面進(jìn)行研究，其結(jié)果如下：
　　 論文首先運(yùn)用抗腫瘤細(xì)胞活性跟蹤實(shí)驗(yàn)，通過(guò)

2、新型高通量逆流色譜和制備色譜技術(shù)分離純化和鑒定了3種抗腫瘤效果最為顯著的化合物單體-23，24-二氫葫蘆素B，穿心蓮內(nèi)酯及熊果酸。
　　 其次運(yùn)用多種類型人腫瘤細(xì)胞株系模型，確定23，24-二氫葫蘆素B可通過(guò)時(shí)間及劑量依賴性的方式抑制Bcap37等6株腫瘤細(xì)胞的體外增殖，并能通過(guò)阻滯Bcap37細(xì)胞于G2/M期，發(fā)生DNA片段化、caspase激酶活性升高及細(xì)胞色素c從線粒體釋放至細(xì)胞質(zhì)等現(xiàn)象，最終導(dǎo)致Bcap37細(xì)胞發(fā)生線粒體

3、通路介導(dǎo)—caspase依賴的細(xì)胞凋亡。
　　 本論文從中藥配伍能提高腫瘤治療效果得到提示，結(jié)合體外抗腫瘤模型實(shí)驗(yàn)結(jié)果，將穿心蓮內(nèi)酯與5-FU進(jìn)行聯(lián)合用藥，實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明在線粒體膜電位下降的同時(shí)，復(fù)方化合物通過(guò)提高Bax，p53的表達(dá)及caspase-8的活性，大幅度提高了caspase-8依賴的線粒體途徑誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡率，從而顯著降低了腫瘤細(xì)胞的存活率。
　　 論文最后利用R-HepG2這一肝癌耐藥株模型對(duì)熊果酸的耐藥性

4、及其相關(guān)的分子機(jī)制作了較為深入的研究，結(jié)果闡明熊果酸通過(guò)時(shí)間及劑量依賴性的方式抑制多藥耐藥株腫瘤細(xì)胞R-HepG2的體外增殖，并用實(shí)驗(yàn)證明該結(jié)果是通過(guò)caspase非依賴的凋亡誘導(dǎo)作用實(shí)現(xiàn)的，通過(guò)免疫熒光及siRNA實(shí)驗(yàn)，進(jìn)一步證實(shí)了熊果酸誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡主要是通過(guò)AIF完成的，并伴有線粒體相關(guān)蛋白Bak的激活。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，熊果酸能有效抑制R-HepG2腫瘤細(xì)胞在體內(nèi)的增殖，并且對(duì)小鼠的機(jī)體基本無(wú)傷害，而且進(jìn)一步證明該體內(nèi)腫瘤抑制作