球松素對(duì)脂多糖致人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　 選擇體外培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（human umbilical vascular endothelial cell，HUVEC）為研究對(duì)象，采用脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）誘導(dǎo)其活化，復(fù)制體外血管內(nèi)皮細(xì)胞（vascular endothelial cell，VEC）損傷模型，觀察球松素（Pinostrobin）對(duì)損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用，從而探討蜂膠黃酮類單體球松素抗動(dòng)脈粥樣硬化（Ath

2、erosclerosis，AS）的作用及其機(jī)制。
　　 方法：
　　 1.消化灌注法培養(yǎng)HUVEC，鑒定后用于實(shí)驗(yàn)。
　　 2.脂多糖誘導(dǎo)建立人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷模型。
　　 3.倒置顯微鏡下觀察HUVEC的形態(tài)變化。
　　 4.MTT比色法觀察球松素對(duì)HUVEC活性的影響。
　　 5.酶聯(lián)免疫吸附法（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）檢測(cè)

3、細(xì)胞上清液中一氧化氮（nitric oxide，NO）含量。
　　 6.脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記法（Terminal-deoxynucleotidylTransferase mediated Nick End Labeling，TUNEL）檢測(cè)HUVEC凋亡率。
　　 7.硫代巴比妥酸（Thibabituric Acid，TBA）法和黃嘌呤氧化酶（Xanthine Oxidase，XOD）法測(cè)定檢測(cè)細(xì)胞

4、上清液中丙二醛（maleic dialdehyde，MDA）及超氧化物歧化酶（superoxide dimutase，SOD）含量。
　　 結(jié)果：
　　 1.HUVEC的形態(tài)變化：倒置顯微鏡動(dòng)態(tài)觀察，對(duì)照組細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好，細(xì)胞呈梭形，單層鋪路石狀排列，折光性好。模型組細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則，細(xì)胞收縮變圓，邊界不清，部分細(xì)胞脫落；球松素組及陽(yáng)性對(duì)照組可見(jiàn)細(xì)胞間隙變窄，形態(tài)趨于正常。
　　 2.MTT比色法觀察HUVEC活

5、性：較之對(duì)照組，模型組HUVEC活性明顯降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。不同時(shí)間點(diǎn)球松素組均可抑制LPS誘導(dǎo)的HUVEC活性降低，較之模型組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。HUVEC活性隨球松素濃度的增加而有增強(qiáng)的趨勢(shì)。
　　 3.酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)NO含量：模型組與對(duì)照組相比較，NO分泌均明顯降低，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。球松素各濃度組與模型組相比，NO分泌增強(qiáng)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），球松素作用6h后，隨時(shí)

6、間延長(zhǎng)，NO分泌隨有降低的趨勢(shì)。
　　 4.TUNEL法檢測(cè)HUVEC凋亡率： TUNEL法示球松素作用時(shí)間為1h、3h時(shí)，細(xì)胞凋亡率的改變無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；其它各時(shí)間點(diǎn)模型組與對(duì)照組相比較，細(xì)胞凋亡率明顯增高，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。不同濃度球松素組HUVEC凋亡率明顯低于模型組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），并呈現(xiàn)出一定的濃度依賴趨勢(shì)。
　　 5.硫代巴比妥酸法和黃嘌呤氧化酶法測(cè)定檢測(cè)細(xì)胞上清液

7、中MDA及SOD含量：較之對(duì)照組，模型組SOD活性明顯降低（P<0.05），具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。不同濃度球松素組與模型組比較SOD活性明顯升高（P<0.01），有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義：結(jié)果呈現(xiàn)出一定的濃度依賴趨勢(shì)；細(xì)胞上清液中的MDA含量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 6.球松素與辛伐他汀聯(lián)合用藥：球松素或辛伐他汀單一藥物預(yù)處理組與未用藥組比較，HUVEC活性增強(qiáng)、NO分泌增多、細(xì)胞凋亡率降低，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；球松素和辛伐他汀聯(lián)合預(yù)處理

8、組與單一藥物預(yù)處理組比較，細(xì)胞活性增強(qiáng)、NO分泌增多、細(xì)胞凋亡率降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。各項(xiàng)指標(biāo)A2水平和B2水平的均數(shù)之差均小于A1水平和B1水平的均數(shù)之差，顯示球松素和辛伐他汀聯(lián)合應(yīng)用對(duì)于保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞有協(xié)同作用。
　　 結(jié)論：
　　 1.球松素可改善內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)、增強(qiáng)HUVEC活性及NO分泌，降低HUVEC凋亡率，證明球松素具有保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞功能的作用。
　　 2.球松素可增強(qiáng)細(xì)胞上清液SO