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文檔簡介
1、納他霉素(Natamycin)是一種廣譜的抗霉菌、酵母菌等真菌的多烯大環(huán)內(nèi)酯類抗生素,可有納塔爾鏈霉菌(Streptomycesna talensis)、恰塔努加鏈霉菌(Streptomyces chatanoogensis)和褐黃孢鏈霉菌(Streptomyces gilvosporeus)等經(jīng)發(fā)酵生產(chǎn)。與其他化學防腐劑相比,納他霉素使用量僅有10-6數(shù)量級,且適用的pH值范圍較廣。納他霉素無毒、且不致突變、不致癌、不致畸、不致敏,同
2、時使用中也不影響產(chǎn)品風味,被譽為是一種高效、安全生物防腐劑。本實驗以褐黃孢鏈霉菌Streptomyces gilvosporeus,ATCC13326為出發(fā)菌株,其遺傳背景相對清楚,產(chǎn)量低而穩(wěn)定。本文采取以下方法對其進行了初步研究,結果如下:
采用高溫馴化方法對褐黃孢鏈霉菌Streptomyces gilvosporeus,ATCC 13326進行菌種改良。經(jīng)過數(shù)輪溫度梯度馴化培養(yǎng),最終篩選到一株適應36℃條件生長,且生孢
3、子速度快、孢子飽滿均勻的HS-5菌株。將高溫馴化選育出的HS-5菌株于分離平板培養(yǎng)。結果發(fā)現(xiàn)其菌落形態(tài)特征與出發(fā)菌株對比有明顯變化。對HS-5菌株做種子生長曲線和分批發(fā)酵動力學實驗,結果發(fā)現(xiàn)種齡與出發(fā)菌株相比提前6 h;菌體生長的穩(wěn)定期,納他霉素的合成期與出發(fā)菌株相比都有延長;同時納他霉素產(chǎn)量也比出發(fā)菌株產(chǎn)量提高了41.3[%]。
以高溫馴化選育出的HS-5菌株為出發(fā)菌株,采用化學誘變劑DES誘變處理,結合紅霉素抗性平板及
4、突變株遺傳穩(wěn)定性實驗選育抗性突變株。最終選育到一株納他霉素高產(chǎn)菌株DS-C-13,產(chǎn)量達到219.42.±2.82 mg/L。
對選育出的DS-C-13菌株進行培養(yǎng)條件和培養(yǎng)基優(yōu)化。研究了接種量、溶氧、碳氮源對其納他霉素發(fā)酵的影響。在優(yōu)化條件下,即在接種量4[%]、裝液量30 mL/250 mL、葡萄糖50 g/L、酵母膏5 g/L、大豆蛋白胨20 g/L的條件下發(fā)酵,納他霉素產(chǎn)量達到256.32 mg/L,比優(yōu)化前提高1
5、6.82[%]。為進一步提高該菌株納他霉素產(chǎn)量,在單因素實驗基礎上,采用響應面法對納他霉素發(fā)酵工藝做進一步優(yōu)化。根據(jù)Box-Benhnken的中心組合實驗設計原理,選取對納他霉素發(fā)酵有顯著影響的碳源葡萄糖、接種量和裝液量三個因素,做三因素三水平試驗,優(yōu)化后條件如下:接種量2.7[%]、裝液量29 mL/250 mL、葡萄糖44.63 g/L、酵母膏5 g/L、大豆蛋白胨20 g/L。參照理論上的最佳發(fā)酵工藝條件進行驗證實驗,結果納他霉素
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