多拉菌素高產(chǎn)菌株的選育.pdf

1、多拉菌素是一種大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗蟲(chóng)抗生素，屬于阿維菌素族的結(jié)構(gòu)類(lèi)似物。生物活性與阿維菌素相近，是迄今發(fā)現(xiàn)的最有效的抗寄生蟲(chóng)劑之一。多拉的抗蟲(chóng)譜廣，消除率低，因此具有更廣闊的應(yīng)用前景。本論文通過(guò)菌種選育迅速提高多拉菌素產(chǎn)生菌的生產(chǎn)能力，然后用響應(yīng)面法對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行優(yōu)化，對(duì)培養(yǎng)條件進(jìn)行優(yōu)化，測(cè)定發(fā)酵過(guò)程中的參數(shù)，為產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)提供可靠的工藝參數(shù)。
　　 首先通過(guò)對(duì)多拉菌素產(chǎn)生菌C-1的復(fù)壯，獲得了一株產(chǎn)量較高，遺傳性狀穩(wěn)定的菌株C-3-8，產(chǎn)

2、量比出發(fā)菌株C-1提高了50％以上。以C-3-8為參試菌，比較了紫外誘變、自然分離、亞硝基胍誘變的效果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)對(duì)于菌株C-4-26自然分離的效果明顯優(yōu)于其它兩種誘變方法。對(duì)菌株C-4-26純化兩代后得到菌株C-6-27，以菌株C-6-27為出發(fā)菌株，進(jìn)行了抗前體環(huán)己甲酸鈉耐性篩選、抗鏈霉素耐性篩選、抗吉他霉素耐性篩選、抗慶大霉素耐性篩選、抗利福霉素耐性篩選，結(jié)合自然選育，最終獲得了多拉菌素最高產(chǎn)量達(dá)458mg/L的菌株C-13-17，

3、比出發(fā)菌株提高了6.6倍。
　　 此外，在搖瓶水平進(jìn)行了多拉菌素發(fā)酵培養(yǎng)基優(yōu)化的研究，探索了不同碳氮源、不同碳氮比、前體添加時(shí)間及添加量對(duì)多拉菌素產(chǎn)量的影響，在最優(yōu)碳氮源和碳氮比的基礎(chǔ)上，通過(guò)響應(yīng)面法確定了發(fā)酵培養(yǎng)基的最佳濃度（g/L）：玉米淀粉108，復(fù)合氮源（棉籽餅粉、蛋白胨）21，α-淀粉酶0.2，CaCO37。
　　 另外，對(duì)多拉菌素的發(fā)酵條件（發(fā)酵溫度、搖瓶裝量、種齡和移種量等）進(jìn)行了考察，發(fā)現(xiàn)250mL 三角