利用RNAi分析水稻化感作用關(guān)鍵酶PAL基因的功能.pdf

1、為證實水稻化感作用的功能性狀與PAL基因功能之間的相關(guān)性，揭示水稻化感作用的分子生態(tài)學過程與機制，以強化感水稻品種PI312777為材料，從化感水稻PI312777植株中提取基因組DNA，根據(jù)GenBank中PAL基因的保守序列，設(shè)計合成RNAi引物，PCR擴增出PAL基因片段并克隆到pMD-18 T easy載體，測序確定其正確性，獲得PAL基因320bp序列。再將PAL基因片段(320bp)正反向連接于載體PTCK-303內(nèi)含子兩端

2、，構(gòu)建成RNAi表達載體PTCK303-S-A，通過根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化水稻，對水稻進行GUS染色，PCR檢測，證明外源基因已經(jīng)成功整合到水稻基因組中，獲得轉(zhuǎn)基因水稻。熒光定量PCR檢測結(jié)果：轉(zhuǎn)基因正常氮與低氮PI葉組織中的PAL基因表達量是對照未轉(zhuǎn)基因正常氮，低氮PI葉組織中PAL基因表達量的70％與75％，轉(zhuǎn)基因正常氮與低氮PI葉組織中的PAL基因干擾效率分別為30％與25％。與對照未轉(zhuǎn)基因正常氮下相比，對照未轉(zhuǎn)基因低氮下PI葉組織中

3、的PAL基因上調(diào)表達2.12倍。轉(zhuǎn)基因低氮P工葉組織的PAl?；蛞采险{(diào)表達，與轉(zhuǎn)基因正常氮下相比上調(diào)2.32倍。PAL酶活性檢測結(jié)果：轉(zhuǎn)基因正常氮PI水稻PAL酶活性下調(diào)，與未轉(zhuǎn)基因正常氮P工水稻PAL酶活性相比降低64％，說明PAL基因被干擾。在不同氮素條件下水稻抑草潛力的變化結(jié)果：在源于轉(zhuǎn)基因PI312777正常氮處理液中培養(yǎng)的稗草，其稗草干物重均大于未轉(zhuǎn)基因PI312777、Lemont正常氮處理液培養(yǎng)的稗草的對應(yīng)值，其抑制率則