阿霉素-姜黃素共輸送脂質(zhì)納米載藥系統(tǒng)抗肝癌研究.pdf

1、原發(fā)性肝細(xì)胞癌（Hepatocellular carcinoma，HCC）是嚴(yán)重危害人類健康的重大疾病，由于肝癌細(xì)胞通常存在著原發(fā)性耐藥，目前用于治療原發(fā)性肝癌的化療藥物非常有限，單一化療藥物的治療效果較差。阿霉素（Doxorubicin，DOX）是治療肝癌的一線臨床用藥，但是存在治療窗窄、心臟毒性大、耐藥性強(qiáng)等問(wèn)題，嚴(yán)重制約其臨床應(yīng)用。姜黃素（Curcumin，Cur）來(lái)源于姜科植物姜黃，是一種有應(yīng)用前景的化療增敏劑，但其存在穩(wěn)定性差

2、、生物利用度低等問(wèn)題。近年來(lái)，有文獻(xiàn)報(bào)道采用納米載藥系統(tǒng)對(duì)化療藥物和化療增敏劑進(jìn)行共輸送，以克服腫瘤多藥耐藥（Multidrug resistance，MDR），增強(qiáng)化療藥物對(duì)肺癌、乳腺癌等腫瘤細(xì)胞的殺傷作用，提高化療藥物抗腫瘤治療效果。但是，相關(guān)研究主要局限于細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，缺乏在體研究結(jié)果，以及對(duì)共輸送納米載藥系統(tǒng)增敏機(jī)制的研究。
　　本文工作基于國(guó)家納米藥物工程技術(shù)研究中心在脂質(zhì)納米載藥系統(tǒng)多年研究基礎(chǔ)上，制備阿霉素-姜黃素共輸送

3、脂質(zhì)納米載藥系統(tǒng)（Doxorubicin and curcumin codelivery lipid nanoparticles，DOX/Cur-NPs），并將其應(yīng)用于原發(fā)性肝癌治療，系統(tǒng)研究了DOX/Cur-NPs體外抑制肝癌細(xì)胞增殖及促凋亡活性、體內(nèi)治療原發(fā)性肝癌的藥效，并對(duì)其抗肝癌增敏機(jī)制進(jìn)行了探討，開展的主要研究工作如下：
　?。?）研究了姜黃素脂質(zhì)納米載藥系統(tǒng)（Curcumin-loaded lipid nanopart

4、icles，Cur-NPs）的制備及處方優(yōu)化。根據(jù)溶解度實(shí)驗(yàn)和單因素考察法篩選出Cur-NPs的處方組成及高壓均質(zhì)工藝，通過(guò)四因素五水平中心復(fù)合設(shè)計(jì)（Central composite design，CCD）進(jìn)行處方優(yōu)化。
　?。?）在Cur-NPs的基礎(chǔ)上，制備了DOX/Cur-NPs，并進(jìn)行了表征。DOX/Cur-NPs粒徑在90 nm左右，PDI<0.3，zeta電位90％；DOX/C

5、ur-NPs穩(wěn)定性良好；差示掃描量熱（DSC）及X-射線衍射（XRD）結(jié)果表明DOX與Cur以無(wú)定型形式存在于載體中；體外釋放結(jié)果表明DOX和Cur呈現(xiàn)緩釋現(xiàn)象，DOX釋放行為符合 Ritger-Peppas方程，而 Cur釋放行為符合 Higuchi和Ritger-Peppas方程。
　?。?）研究了 DOX/Cur-NPs體外抑制肝癌細(xì)胞增殖及促凋亡活性。噻唑藍(lán)比色法（MTT法）研究顯示空白脂質(zhì)納米載藥系統(tǒng)對(duì)人肝癌細(xì)胞HepG

6、2和人正常肝細(xì)胞L02基本無(wú)毒性；不同載藥比例的DOX/Cur-NPs(2:1,1:1,1:2)均具有協(xié)同抑制肝癌細(xì)胞增殖和減輕DOX對(duì)正常肝細(xì)胞毒性的作用，其中，DOX與Cur為1:1時(shí)具有最佳協(xié)同效應(yīng)；DOX/Cur-NPs中DOX與Cur協(xié)同作用促進(jìn)了HepG2細(xì)胞的凋亡。
　?。?）開展了 DOX/Cur-NPs治療原發(fā)性肝癌的藥效學(xué)研究。采用二乙基亞硝胺（Diethylnitrosamine，DEN）誘導(dǎo)雄性昆明小鼠產(chǎn)生

7、原發(fā)性肝癌，以體重變化、生存率、肝功能、相對(duì)肝重量、肝表面結(jié)節(jié)數(shù)目和最大結(jié)節(jié)直徑、病理學(xué)觀察為指標(biāo)，結(jié)果顯示，DOX/Cur-NPs具有協(xié)同抑制HCC生長(zhǎng)的效果；同時(shí)，在造模過(guò)程給予一定劑量Cur-NPs，發(fā)現(xiàn)其對(duì)原發(fā)性肝癌發(fā)生發(fā)展具有明顯的減緩效應(yīng)。
　?。?）對(duì)DOX/Cur-NPs的化療增敏機(jī)制進(jìn)行了探討。采用實(shí)時(shí)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）、Western blotting及免疫組化方法研究DOX/Cur-NPs對(duì)HCC

8、凋亡、增殖、血管發(fā)生、耐藥等途徑中的關(guān)鍵mRNA及蛋白表達(dá)的影響，結(jié)果表明DOX/Cur-NPs通過(guò)促進(jìn)凋亡、抑制增殖和血管發(fā)生、逆轉(zhuǎn)MDR實(shí)現(xiàn)協(xié)同治療HCC的效果。MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)一步證明DOX/Cur-NPs對(duì)MDR的逆轉(zhuǎn)作用。Cur-NPs對(duì)HCC的預(yù)防機(jī)制在于抑制血管發(fā)生和缺氧。
　　本論文研究結(jié)果表明，DOX/Cur-NPs增強(qiáng)了對(duì)原發(fā)性肝癌的治療作用，且具有良好的安全性，實(shí)現(xiàn)了協(xié)同抗癌的效果。其增敏機(jī)制可能是通過(guò)促進(jìn)原