蒽貝素對脂多糖誘導小鼠心臟炎癥損傷的影響.pdf

1、在過去的20年中，膿毒癥一直呈逐年上升趨勢，病死率高達50％以上。其導致各臟器衰竭的病理生理機制尚未明確，降低其病死率一直成為危重病學難以攻破的重大難題。膿毒癥患者通常伴有心功能障礙。蒽貝素(Embelin)是白花酸藤果的主要成分，近來越來越多的研究表明蒽貝素還具有抗氧化、護肝、抗糖尿病、抗菌、抗癌等作用，并可在多種器官中發(fā)揮抗炎作用。
　　目的:
　　本研究旨在利用LPS誘導的膿毒癥小鼠模型，觀察蒽貝素對膿毒癥心肌損傷是否

2、具有保護作用，探討過氧化物酶增殖物激活受體γ(peroxisomeproliferator-activated receptorγ，PPARγ)是否參與了蒽貝素的心肌保護作用，并闡明NF-κB、TNF-α在其中的作用。
　　方法:
　　1、實驗分組
　　雄性C57BL/6J(B6)小鼠隨機分為5組（n=17）?？瞻讓φ战M(Control):小鼠腹腔注射等量的生理鹽水。膿毒癥模型組(LPS):小鼠腹腔注射LPS(10 m

3、g/kg)。蒽貝素治療組(embelin):小鼠腹腔注射LPS(10 mg/kg)，30分鐘后注射不同濃度蒽貝素(5，10，and20 mg/kg，i.p.)。
　　2、心肌肌鈣蛋白Ⅰ的檢測:小鼠眼眶取血后，分離血清。雙位點酶免法（夾心法）測定血清中心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cardiac troponinⅠ，cTnⅠ)含量。
　　3、免疫組化法檢測心肌組織PPAR-γ和TNF-α蛋白含量:左心室組織，置于10％中性福爾馬林中固定后，

4、常規(guī)包埋、切片、脫水、封閉后，PPAR-γ或TNF-α一抗（兔IgG，稀釋倍數(shù)1∶100）4℃過夜，二抗室溫37℃孵育30分鐘，DAB顯色。
　　4、Western blot檢測細胞核內(nèi)NF-κB蛋白含量:取心臟左心室心尖部分，勻漿提核蛋白，用Western Blot來檢測NF-κB蛋白表達情況。
　　結果:
　　1、心肌損傷指標心肌肌鈣蛋白Ⅰ的檢測
　　與空白對照組相比，膿毒癥模型組小鼠血清cTnⅠ水平明顯增高

5、（5.15±0.25ng/ml，vs空白對照組0.11±0.02 ng/ml）。與膿毒癥模型組小鼠相比，低濃度蒽貝素治療組小鼠血清cTnⅠ水平無明顯差異。而中、高濃度蒽貝素治療組小鼠血清cTnⅠ水平明顯低于膿毒癥模型小鼠，且呈現(xiàn)濃度依賴性（分別為3.96±0.33 ng/ml和2.51±0.19ng/ml）。
　　2、HE染色觀察心肌細胞結構
　　空白對照組小鼠心肌HE染色顯示心肌纖維形態(tài)結構正常，心肌纖維結構清晰，著色均勻

6、。膿毒癥模型組小鼠心肌肌絲多數(shù)斷裂，排列紊亂，結構明顯被破壞。中、高濃度蒽貝素治療組與膿毒癥模型組相比，肌絲斷裂情況明顯好轉，心肌纖維結構更為清晰。
　　3、免疫組化檢測心肌細胞中PPAR-γ蛋白的表達結果
　　空白對照組PPAR-γ蛋白表達較少。與正常對照組相比，膿毒癥模型組中PPAR-γ蛋白表達無明顯差異。中、高濃度蒽貝素治療組PPAR-γ蛋白表達同樣明顯增加，表現(xiàn)為在心肌組織的細胞胞漿及胞核中只見少量棕黃色顆粒。

7、>　　4、免疫組化檢測心肌細胞中TNF-α蛋白的表達結果
　　空白對照組TNF-α幾乎只有少量表達，心肌組織中未見明顯的棕黃色顆粒，膿毒癥模型組中TNF-α表達明顯，表現(xiàn)為在心肌組織的細胞胞漿及胞核中可見大量棕黃色顆粒。與膿毒癥模型組相比，中、高濃度蒽貝素治療組TNF-α蛋白表達明顯減少。
　　5、western blot測定小鼠心臟細胞核NF-κB蛋白表達
　　Western blot檢測顯示，在正常對照組小鼠心肌組