多巴胺經(jīng)D2類受體抑制脂多糖誘導(dǎo)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的炎癥反應(yīng).pdf

1、目的：探索多巴胺及多巴胺受體在脂多糖（LPS）誘導(dǎo)的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞相關(guān)炎癥中的作用及機(jī)制。
　　方法：
　　1.腹腔注射巰基乙酸鹽肉湯后四天后，獲取C57野生型(TLR4+/+)小鼠原代腹腔巨噬細(xì)胞進(jìn)行研究，多巴胺分別以不同濃度（10-6，10-5，10-4mol/L）和時(shí)間(0.5，1，2h)預(yù)處理小鼠原代腹腔巨噬細(xì)胞后，1μg/ml LPS作用細(xì)胞6h。運(yùn)用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清中TNF-α濃度

2、，Western-blot檢測(cè)TLR4、pro-IL-1β的表達(dá)，CCK8檢測(cè)細(xì)胞活力，篩選多巴胺抑炎的最佳濃度和時(shí)間。
　　2.小鼠原代腹腔巨噬細(xì)胞按如下分組處理：對(duì)照組(正常培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞)、LPS刺激組(1μg/ml LPS刺激6 h）、多巴預(yù)處理組（多巴胺預(yù)處理后1μg/ml LPS刺激6h）、多巴胺受體拮抗劑組（多巴胺D1類或D2類受體拮抗劑預(yù)處理后，再加入多巴胺及LPS）、多巴受體激動(dòng)劑組（多巴D1類受體或D2類受體激

3、動(dòng)劑預(yù)處理后加入LPS）。運(yùn)用ELISA檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清中TNF-α濃度，Western-blot檢測(cè)TLR4、pro-IL-1β的表達(dá)。
　　3.原代培養(yǎng)野生型（TLR4+/+）和TLR4基因缺失（TLR4-/-）小鼠腹腔巨噬細(xì)胞，分別按如下分組處理:對(duì)照組(正常培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞)、LPS刺激組(1μg/ml LPS刺激6h）、多巴胺預(yù)處理組（多巴胺預(yù)處理后1μg/ml LPS刺激6h）。運(yùn)用ELISA檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清中TNF-α

4、濃度，Western-blot檢測(cè)TLR4、pro-IL-1β的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.ELISA和Western-blot結(jié)果顯示，與LPS刺激組相比，10-4mol/L多巴胺預(yù)處理小鼠腹腔巨噬細(xì)胞2h能夠有效抑制LPS誘導(dǎo)的TNF-α、TLR4、pro-IL-1β表達(dá)（P<0.05），CCK-8結(jié)果顯示各組細(xì)胞活力無(wú)差異（P>0.05）。
　　2.與多巴預(yù)處理組相比，多巴胺D2類受體拮抗劑可減弱多巴胺對(duì)LPS誘

5、導(dǎo)的TNF-α、TLR4、pro-IL-1β表達(dá)的抑制作用（P<0.05），而多巴胺D1類受體拮抗劑則無(wú)此作用；相反，與LPS刺激組相比，多巴胺D2類受體激動(dòng)劑抑制了TNF-α的表達(dá)（P<0.05），而多巴胺D1類受體激動(dòng)劑則對(duì)TNF-α的表達(dá)無(wú)影響。
　　3.與各自LPS刺激組相比，多巴胺預(yù)處理能減少TLR4+/+小鼠腹腔巨噬細(xì)胞TNF-α的分泌及pro-IL-1β的表達(dá)（P<0.05），而多巴胺預(yù)處理對(duì)TLR4-/-小鼠腹腔巨