丹參注射液聯(lián)合心臟干細胞移植治療對急性心肌梗死小鼠的影響.pdf

1、目的:通過分別對體外、體內(nèi)小鼠心肌細胞和心臟干細胞的研究，了解丹參注射液聯(lián)合心臟干細胞移植治療對小鼠急性心肌梗死的影響。
　　方法:(1)給予小鼠心肌細胞缺氧培養(yǎng)的同時，給予不同劑量丹參注射液干預，并以空白對照，檢測AnnexinⅤ-PI、Caspase-3、CCK-8，通過Real-Time PCR檢測Akt、BAD、FGF的基因表達。(2)體外小鼠心臟干細胞培養(yǎng)，并行Sca-1+鑒定，給予缺氧培養(yǎng)，同時給予不同劑量丹參注射液干

2、預，并以空白對照，檢測Caspase-3、CCK-8， Edu檢測心臟干細胞DNA的合成。(3)以不同劑量丹參注射液喂養(yǎng)小鼠1周，并以空白對照，檢測小鼠血常規(guī)和肝腎功能指標;將小鼠心臟組織切片檢查，熒光檢測Sca-1+細胞數(shù)量; Real-Time PCR檢測VEGF、IL-6、BAD的基因表達。(4)結(jié)扎小鼠冠狀動脈前降支制作小鼠急性心肌梗死模型，并在心肌梗死周圍區(qū)域心肌內(nèi)注射體外培養(yǎng)的小鼠心臟干細胞，以不同劑量的丹參注射液喂養(yǎng)1周，

3、并以空白對照。取小鼠心臟組織，予CD31檢測、Ki-67染色、Masson檢測、TUNEL檢測，采用Western blot方法檢測小鼠心臟內(nèi)的Akt表達。
　　結(jié)果:(1)小鼠心肌細胞缺氧培養(yǎng)后，丹參注射液高劑量組的AnnexinⅤ-PI與其它兩組相比顯著性降低;丹參注射液低劑量和高劑量組的Caspase-3與對照組相比顯著降低;CCK-8 OD值丹參注射液高劑量組最高，對照組最低，各組間有顯著性差異;FGF基因表達在丹參注射液

4、高劑量組最高，對照組最低，各組之間均有顯著性差異;BAD基因表達在丹參注射液高劑量組最低，對照組最高，各組之間均有顯著性差異;丹參注射液高劑量和低劑量組的Akt基因表達與對照組相比顯著增高，高、低劑量組之間沒有顯著性差異。(2)體外小鼠心臟干細胞缺氧培養(yǎng)后，丹參注射液高劑量組Caspase-3的OD值與低劑量組和對照組相比顯著下降，低劑量組、對照組之間沒有顯著性差異;丹參注射液高劑量組的CCK-8 OD值與低劑量組和對照組相比顯著增高，

5、低劑量組和對照組之間沒有顯著性差異;丹參注射液高劑量和低劑量組的EdU陽性細胞數(shù)與對照組相比顯著增高，高、低劑量組之間沒有顯著性差異。(3)丹參注射液喂養(yǎng)一周的小鼠，各組間的血細胞、肝腎功能無顯著性差別;心臟組織中的Sca-1+心臟成體干細胞的數(shù)量，以丹參注射液高劑量最多，對照組最少，各組間有顯著性差異;VEGF和IL-6的基因表達，均以丹參注射液高劑量組最高，對照組最低，各組間有顯著性差異;丹參注射液高劑量組的Bad基因表達與低劑量組

6、和對照組相比顯著降低，低劑量組和對照組之間沒有顯著性差異。(4)對小鼠急性心肌梗死給予心臟干細胞移植，并喂養(yǎng)丹參注射液一周后，反映梗死周圍區(qū)域新生毛細血管密度的CD31，以丹參注射液高劑量最多，對照組最少，各組間有顯著性差異;檢測細胞核增殖的Ki67染色丹參注射液高劑量組與對照組和低劑量組相比顯著升高，對照組、低劑量組之間沒有顯著性差異;Masson檢測反映的纖維化程度，丹參注射液高劑量組與對照組和低劑量組相比顯著減輕，對照組、低劑量組

7、之間沒有顯著性差異;TUNEL檢測顯示細胞凋亡，丹參注射液高劑量最少，對照組最多，各組間有顯著性差異;磷酸化Akt蛋白表達水平上，以丹參注射液高劑量最多，對照組最少，各組間有顯著性差異;總Akt水平上，丹參注射液高劑量和低劑量組與對照組相比顯著升高，高、低劑量組之間沒有顯著性差異。
　　結(jié)論:本研究通過體內(nèi)、體外多層次實驗證明丹參注射液可以通過Akt通路，有效提高心肌干細胞移植治療心肌梗死的效率，促進組織血管新生，抑制細胞凋亡及組