丹參注射液聯(lián)合心臟干細(xì)胞移植治療對(duì)急性心肌梗死小鼠的影響.pdf

1、目的:通過(guò)分別對(duì)體外、體內(nèi)小鼠心肌細(xì)胞和心臟干細(xì)胞的研究，了解丹參注射液聯(lián)合心臟干細(xì)胞移植治療對(duì)小鼠急性心肌梗死的影響。
　　方法:(1)給予小鼠心肌細(xì)胞缺氧培養(yǎng)的同時(shí)，給予不同劑量丹參注射液干預(yù)，并以空白對(duì)照，檢測(cè)AnnexinⅤ-PI、Caspase-3、CCK-8，通過(guò)Real-Time PCR檢測(cè)Akt、BAD、FGF的基因表達(dá)。(2)體外小鼠心臟干細(xì)胞培養(yǎng)，并行Sca-1+鑒定，給予缺氧培養(yǎng)，同時(shí)給予不同劑量丹參注射液干

2、預(yù)，并以空白對(duì)照，檢測(cè)Caspase-3、CCK-8， Edu檢測(cè)心臟干細(xì)胞DNA的合成。(3)以不同劑量丹參注射液喂養(yǎng)小鼠1周，并以空白對(duì)照，檢測(cè)小鼠血常規(guī)和肝腎功能指標(biāo);將小鼠心臟組織切片檢查，熒光檢測(cè)Sca-1+細(xì)胞數(shù)量; Real-Time PCR檢測(cè)VEGF、IL-6、BAD的基因表達(dá)。(4)結(jié)扎小鼠冠狀動(dòng)脈前降支制作小鼠急性心肌梗死模型，并在心肌梗死周圍區(qū)域心肌內(nèi)注射體外培養(yǎng)的小鼠心臟干細(xì)胞，以不同劑量的丹參注射液喂養(yǎng)1周，

3、并以空白對(duì)照。取小鼠心臟組織，予CD31檢測(cè)、Ki-67染色、Masson檢測(cè)、TUNEL檢測(cè)，采用Western blot方法檢測(cè)小鼠心臟內(nèi)的Akt表達(dá)。
　　結(jié)果:(1)小鼠心肌細(xì)胞缺氧培養(yǎng)后，丹參注射液高劑量組的AnnexinⅤ-PI與其它兩組相比顯著性降低;丹參注射液低劑量和高劑量組的Caspase-3與對(duì)照組相比顯著降低;CCK-8 OD值丹參注射液高劑量組最高，對(duì)照組最低，各組間有顯著性差異;FGF基因表達(dá)在丹參注射液

4、高劑量組最高，對(duì)照組最低，各組之間均有顯著性差異;BAD基因表達(dá)在丹參注射液高劑量組最低，對(duì)照組最高，各組之間均有顯著性差異;丹參注射液高劑量和低劑量組的Akt基因表達(dá)與對(duì)照組相比顯著增高，高、低劑量組之間沒(méi)有顯著性差異。(2)體外小鼠心臟干細(xì)胞缺氧培養(yǎng)后，丹參注射液高劑量組Caspase-3的OD值與低劑量組和對(duì)照組相比顯著下降，低劑量組、對(duì)照組之間沒(méi)有顯著性差異;丹參注射液高劑量組的CCK-8 OD值與低劑量組和對(duì)照組相比顯著增高，

5、低劑量組和對(duì)照組之間沒(méi)有顯著性差異;丹參注射液高劑量和低劑量組的EdU陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)與對(duì)照組相比顯著增高，高、低劑量組之間沒(méi)有顯著性差異。(3)丹參注射液喂養(yǎng)一周的小鼠，各組間的血細(xì)胞、肝腎功能無(wú)顯著性差別;心臟組織中的Sca-1+心臟成體干細(xì)胞的數(shù)量，以丹參注射液高劑量最多，對(duì)照組最少，各組間有顯著性差異;VEGF和IL-6的基因表達(dá)，均以丹參注射液高劑量組最高，對(duì)照組最低，各組間有顯著性差異;丹參注射液高劑量組的Bad基因表達(dá)與低劑量組

6、和對(duì)照組相比顯著降低，低劑量組和對(duì)照組之間沒(méi)有顯著性差異。(4)對(duì)小鼠急性心肌梗死給予心臟干細(xì)胞移植，并喂養(yǎng)丹參注射液一周后，反映梗死周圍區(qū)域新生毛細(xì)血管密度的CD31，以丹參注射液高劑量最多，對(duì)照組最少，各組間有顯著性差異;檢測(cè)細(xì)胞核增殖的Ki67染色丹參注射液高劑量組與對(duì)照組和低劑量組相比顯著升高，對(duì)照組、低劑量組之間沒(méi)有顯著性差異;Masson檢測(cè)反映的纖維化程度，丹參注射液高劑量組與對(duì)照組和低劑量組相比顯著減輕，對(duì)照組、低劑量組

7、之間沒(méi)有顯著性差異;TUNEL檢測(cè)顯示細(xì)胞凋亡，丹參注射液高劑量最少，對(duì)照組最多，各組間有顯著性差異;磷酸化Akt蛋白表達(dá)水平上，以丹參注射液高劑量最多，對(duì)照組最少，各組間有顯著性差異;總Akt水平上，丹參注射液高劑量和低劑量組與對(duì)照組相比顯著升高，高、低劑量組之間沒(méi)有顯著性差異。
　　結(jié)論:本研究通過(guò)體內(nèi)、體外多層次實(shí)驗(yàn)證明丹參注射液可以通過(guò)Akt通路，有效提高心肌干細(xì)胞移植治療心肌梗死的效率，促進(jìn)組織血管新生，抑制細(xì)胞凋亡及組