SARI通過(guò)抑制Src-Akt-Erk信號(hào)通路抑制雌激素誘導(dǎo)的肺腺癌細(xì)胞增殖.pdf

1、目的:
　　肺癌位列所有惡性腫瘤發(fā)病率和死亡率的第一位，就病因?qū)W來(lái)說(shuō)至今卻未被完全理解。近年來(lái)女性肺癌發(fā)病率增長(zhǎng)明顯，并且在患病年齡、發(fā)病時(shí)間、組織類型及生存期等方面存在顯著的性別差異，這可能與性激素及其受體的作用相關(guān)。研究顯示雌激素促進(jìn)肺癌的增殖。因此對(duì)于女性病人需要考慮更佳個(gè)體化的治療。臨床試驗(yàn)證實(shí)抗雌激素治療加靶向治療對(duì)一些肺癌患者效果明顯。但是其具體機(jī)制還不甚明了，有待更進(jìn)一步的深入研究。SARI(Suppressor o

2、fAP-1，regulated by IFN)是近年新發(fā)現(xiàn)的抑癌基因，它能抑制轉(zhuǎn)錄因子AP-1，90％的人類癌癥中都存在AP-1活性增高。將SARI遞送到癌細(xì)胞，可抑制癌細(xì)胞增殖，促進(jìn)細(xì)胞凋亡。由于90％的癌癥都基于相似機(jī)制來(lái)存活和生長(zhǎng)，所以SARI被認(rèn)為可能成為多種癌癥治療的有效分子靶點(diǎn)。本課題小組的前期研究結(jié)果顯示SARI與肺腺癌的侵襲轉(zhuǎn)移有明顯的關(guān)系，SARI能通過(guò)調(diào)節(jié)上皮間質(zhì)化現(xiàn)象(EMT)，從而抑制肺腺癌的侵襲與轉(zhuǎn)移。但對(duì)于S

3、ARI是否能抑制肺腺癌細(xì)胞中雌激素的促增殖作用從而抑制肺腺癌的增殖與轉(zhuǎn)移卻從未被研究過(guò)。本實(shí)驗(yàn)擬探究SARI與肺腺癌細(xì)胞中雌激素信號(hào)通路的關(guān)系。
　　方法:
　　通過(guò)轉(zhuǎn)染真核重組質(zhì)粒pcDNA-SARI的方法在肺腺癌細(xì)胞A549中過(guò)表達(dá)SARI蛋白，噻唑藍(lán)(MTr)比色法觀察雌激素處理前后細(xì)胞增殖情況，Westernblotting法檢測(cè)雌激素誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖信號(hào)通路中相關(guān)蛋白Src，Akt及Erk的表達(dá)及活化情況。
　

4、　結(jié)果:
　　1.將pcDNA-SARI與相應(yīng)空載體(pcDNA-Vec)轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞，Westernblotting法檢測(cè)SARI蛋白表達(dá)。結(jié)果顯示，肺腺癌細(xì)胞A549中SARI極低表達(dá)。往肺腺癌細(xì)胞A549中轉(zhuǎn)染入真核重組表達(dá)質(zhì)粒pcDAN-SARI后，與空白組及空載體對(duì)照組(Control vector組)相比，pcDNA-SARI組SARI蛋白表達(dá)明顯增強(qiáng)，成功建立高表達(dá)SARI A549細(xì)胞模型，為下一步有關(guān)SARI

5、抑制雌激素誘導(dǎo)的肺腺癌增殖機(jī)理的研究奠定了基礎(chǔ)，也使后續(xù)工作成為可能。
　　2.使用MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖能力。雌激素(E2)組增殖率為(148±10)％，細(xì)胞增殖率與對(duì)照組（Control vector組）相比較，上升48％（*P＜0.05），雌激素促進(jìn)肺腺癌細(xì)胞的增殖;雌激素(E2)+pcDNA-SARI組增殖率為(92±4)％，即過(guò)表達(dá)SARI后再用雌激素處理，相比較雌激素(E2)組，細(xì)胞增殖率下降56％（**P＜0.05）。

6、pcDNA-SARI組增殖率為(68±6)％。說(shuō)明SARI抑制雌激素誘導(dǎo)的肺腺癌細(xì)胞增殖。
　　3.Western blotting法檢測(cè)各組中Src蛋白的表達(dá)情況。用雌激素處理后，pSrcy416表達(dá)增強(qiáng)，相對(duì)表達(dá)量為2.59±0.36，而總Src表達(dá)不變;但是當(dāng)過(guò)表達(dá)SARI后，再用雌激素處理，pSrcy416表達(dá)下調(diào)，相對(duì)表達(dá)量為0.88±0.22，總Src表達(dá)不變。兩組pSrcy416蛋白表達(dá)量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（*P＜0.

7、05）。說(shuō)明SARI抑制雌激素誘導(dǎo)的肺腺癌細(xì)胞A549 Src蛋白的磷酸化。
　　4.Western blotting法檢測(cè)各組中Akt的表達(dá)情況。予雌激素處理后，pAkts473表達(dá)增強(qiáng)，相對(duì)表達(dá)量為2.77±0.48，而總Akt表達(dá)不變;但當(dāng)過(guò)表達(dá)SARI后再予雌激素處理， pAkts473表達(dá)下調(diào)，相對(duì)表達(dá)量為0.86±0.21，而總Akt表達(dá)不變。兩組pAkts473蛋白表達(dá)量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（*P＜0.05）。說(shuō)明SAR

8、I能抑制雌激素誘導(dǎo)的肺腺癌細(xì)胞A549 Akt蛋白的磷酸化。
　　5.Western blotting法檢測(cè)各組Erk蛋白的表達(dá)情況。予雌激素處理后，pErk蛋白表達(dá)增強(qiáng)，相對(duì)表達(dá)量為3.48±0.47，而Ekr2總蛋白表達(dá)不變;但當(dāng)過(guò)表達(dá)SARI后再給予雌激素處理，pErk表達(dá)下調(diào)，相對(duì)表達(dá)量為0.91±0.09，而Ekr2總蛋白表達(dá)不變。兩組pErk蛋白表達(dá)量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(*P＜0.05)。說(shuō)明SARI抑制雌激素誘導(dǎo)的肺腺

9、癌細(xì)胞A549 Erk蛋白的磷酸化。綜合以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果，說(shuō)明SARI抑制肺腺癌細(xì)胞中雌激素誘導(dǎo)的Src-Akt-Erk信號(hào)通路的活化。
　　結(jié)論:
　　1.在肺腺癌A549細(xì)胞中，SARI極低表達(dá)。當(dāng)將pcDNA-SARI轉(zhuǎn)染入A549細(xì)胞，pcDNA-SARI組SARI蛋白表達(dá)明顯增強(qiáng)，成功在A549細(xì)胞中過(guò)表達(dá)SARI。
　　2.雌激素促進(jìn)肺腺癌細(xì)胞的增殖，SARI不僅能抑制肺腺癌細(xì)胞的增殖，而且能抑制雌激素誘導(dǎo)的肺

10、腺癌細(xì)胞增殖。
　　3.雌激素促進(jìn)肺腺癌增殖其相關(guān)機(jī)制可能與雌激素激活Src-Akt-Erk信號(hào)通路有關(guān)。SARI能夠抑制雌激素誘導(dǎo)的肺腺癌細(xì)胞增殖，潛在的機(jī)制可能是通過(guò)抑制肺腺癌細(xì)胞中Src-Akt-Erk信號(hào)通路活化。本研究不僅豐富了我們對(duì)雌激素促肺癌增殖作用的分子機(jī)制的認(rèn)識(shí)，也促進(jìn)對(duì)SARI抑制肺癌生長(zhǎng)增殖相關(guān)機(jī)制的認(rèn)識(shí)，為SARI成為肺癌治療分子靶點(diǎn)提供一些理論依據(jù)。但目前只是初步研究，臨床的應(yīng)用尚需要大量研究進(jìn)一步證實(shí)。