CaN-NFATs-ET1通路在肺癌細胞A549增殖中的作用.pdf

1、分類號：密級：UDC：學號：406522511361南昌大學碩士研究生學位論文CaNNFATsET1通路在肺癌細胞通路在肺癌細胞A549A549增殖中的作用增殖中的作用EffectsofCaNNFATsET1PathwayonProliferationofLungCancerCellA549廖文杰培養(yǎng)單位（院、系）：南昌大學醫(yī)學院藥學系指導教師姓名、職稱：李蓉教授申請學位的學科門類：醫(yī)學申請學位的學科門類：醫(yī)學學科專業(yè)名稱：藥理學論文答

2、辯日期：2014年6月答辯委員會主席：任軍評閱人：盲審2014年6月10日摘要摘要目的目的：前期研究發(fā)現(xiàn)具有中度成瘤性的人胚腎細胞(HumanEmbryonicKidney293cellHEK293細胞)在靜息狀態(tài)下就存在NFATs的活化，且外源導入CHP2基因可通過促進HEK293細胞中活化T細胞核因子（nuclearfactofactivatedTcellsNFATs）的活化及內皮素1（endothelin1ET1）的表達，促進腫瘤

3、細胞的生長。本研究旨在分析不同癌細胞株中NFATs及ET1的表達差異，闡明與肺癌細胞A549增殖和遷移相關的NFATs亞型的種類及其組成性活化狀態(tài)，并探討NFATs組成型活化促肺癌細胞增殖和遷移的機制。這方面的研究將有助于深化我們對CaNNFATc1ET1通路在腫瘤發(fā)生發(fā)展中作用的認識，為抗腫瘤藥物的研究提供新的作用靶點。方法方法：1.通過生物信息學技術，分析不同癌細胞株中NFATs及ET1的表達差異。2.通過逆轉錄聚合酶鏈式反應（re

4、versetranscriotionpolymerasechainreactionRTPCR）和蛋白印跡(Westernblot)技術檢測多種非小細胞肺癌細胞（H23、H1299和A549）和正常人支氣管上皮細胞（HBE）中NFATs及ET1的mRNA和蛋白表達水平，同時應用核漿分離和免疫熒光技術確定肺癌細胞A549及HBE細胞中NFATs的核、漿分布情況；3.采用細胞計數(shù)和細胞增殖—毒性檢測方法來比較肺癌細胞A549及HBE細胞的增殖

5、差別；4.分別借助劃痕實驗和軟瓊脂實驗觀察細胞的遷移和集落形成情況，以判斷肺癌細胞A549及HBE細胞的侵襲能力；5.應用單細胞克隆實驗，驗證肺癌細胞A549和HBE細胞的成瘤能力；6.使用CaNNFATs通路阻斷劑CsA阻斷鈣調磷酸酶（CaN）的活性，觀察其對肺癌細胞A549及HBE細胞的影響（包括NFATs和ET1的表達水平以及細胞增殖情況）。結果結果：1.NFATc1NFATc4和ET1在不同癌細胞株中有表達，但不同癌細胞株中表達