核酸適體探針對血液腫瘤細(xì)胞的識別及其穩(wěn)定性研究.pdf

1、血液腫瘤是威脅人類健康的常見惡性腫瘤之一。對血液腫瘤細(xì)胞的準(zhǔn)確分型，有利于實(shí)現(xiàn)血液腫瘤的早期診斷和治療并提高血液腫瘤的治愈率。基于SELEX技術(shù)篩選的核酸適體探針不僅具有類似于抗體的高親和力和高特異性，在許多方面更優(yōu)于抗體，有望作為一種新型的“診斷抗體”，應(yīng)用于血液腫瘤的診斷與治療。本論文瞄準(zhǔn)這一前沿研究方向，圍繞基于細(xì)胞-SELEX技術(shù)篩選的核酸適體探針對血液腫瘤細(xì)胞的識別及其在血液中的穩(wěn)定性研究，開展了以下三個方面工作： 1

2、、基于細(xì)胞-SELEX技術(shù)篩選的核酸適體探針對不同環(huán)境中惡性淋巴瘤細(xì)胞的識別研究 采用流式細(xì)胞術(shù)，系統(tǒng)地考察了基于細(xì)胞-SELEX技術(shù)篩選的用于特異性識別惡性淋巴瘤Ramos細(xì)胞的核酸適體探針TD05對置于不同環(huán)境中的體外培養(yǎng)Ramos細(xì)胞和原代培養(yǎng)Ramos細(xì)胞的識別效果，并與針對Ramos細(xì)胞細(xì)胞膜表面抗原的特異性抗體CD19識別Ramos細(xì)胞的情況進(jìn)行比較。結(jié)果表明：TD05能有效識別置于不同環(huán)境中不同來源的Ramos細(xì)胞

3、，顯示出優(yōu)越的反應(yīng)條件適應(yīng)性。它有望作為一種新型“診斷抗體”，在血液腫瘤的早期診斷與臨床檢測中發(fā)揮重要作用。 2、基于細(xì)胞-SELEX技術(shù)篩選的核酸適體探針血液穩(wěn)定性研究 分別采用20％變性聚丙烯酰胺凝膠電泳和流式細(xì)胞術(shù)，對核酸適體探針TD05在血液中的穩(wěn)定性進(jìn)行了考察。在不影響核酸適體探針識別腫瘤細(xì)胞的親和力和特異性的前提下，通過反轉(zhuǎn)T堿基和鎖核酸這兩種化學(xué)修飾方法分別對TD05進(jìn)行修飾，并對修飾后的TD05的血液穩(wěn)定

4、性進(jìn)行了考察。在此基礎(chǔ)上，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測了修飾后的TD05對腫瘤細(xì)胞的親和力和特異性的變化。結(jié)果表明：反轉(zhuǎn)T堿基和鎖核酸的修飾能有效提高TD05的血液穩(wěn)定性，使TD05的半衰期從0.5小時延長至3小時以上，并且不影響其識別Ramos細(xì)胞的親和力和特異性，為進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)核酸適體探針TD05在活體檢測中的應(yīng)用提供了技術(shù)支持。 3、基于細(xì)胞-SELEX技術(shù)篩選的核酸適體探針識別構(gòu)型的初步探討 通過對基于細(xì)胞-SELEX技術(shù)篩

5、選的用于特異性識別急性白血病細(xì)胞的核酸適體探針sgc8c分別進(jìn)行熒光淬滅、熒光共振能量轉(zhuǎn)移標(biāo)記以及PEG和互補(bǔ)序列修飾，通過采用流式細(xì)胞術(shù)對經(jīng)修飾的sgc8c識別急性白血病CCRF-CEM細(xì)胞的情況考察，對sgc8c識別細(xì)胞時所形成的三維構(gòu)型進(jìn)行了初步探討。結(jié)果表明：sgc8c在識別CCRF-CEM細(xì)胞時，其5'端和3'端很可能形成雜交，且此雜交部分對識別CCRF-CEM細(xì)胞起著十分重要的作用。這些結(jié)果的獲得為進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)核酸適體探針sg