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文檔簡介
1、柑橘中的金柑屬在我國栽培歷史悠久,是柑橘中重要的種質(zhì)資源之一。山金柑(Fortunella hindsii Swingle)屬于金柑屬,是蕓香科常綠野生果樹,其植株矮小,童期短,實(shí)生苗一至兩年便可開花結(jié)果,且有單胚和多胚兩種類型,是理想的研究材料,有望作為柑橘果樹的模式植物。本研究以野生單、多胚山金柑為主要研究材料,嘗試花藥培養(yǎng)和常規(guī)育種方法獲得山金柑純系,通過SSR檢測分析不同個(gè)體、不同世代山金柑的純合度差異,并比較了不同株系山金柑以
2、及不同培養(yǎng)方式對(duì)山金柑再生和轉(zhuǎn)化效率的影響,對(duì)其轉(zhuǎn)化體系進(jìn)行了優(yōu)化。主要研究結(jié)果如下:
1.2012年和2013年對(duì)種植在華中農(nóng)業(yè)大學(xué)柑橘資源圃的單胚山金柑進(jìn)行連續(xù)的花期套袋,使其自交,得到自交材料的S1代、S2代。對(duì)其進(jìn)行SSR進(jìn)行分析,共采用了分布于9條染色體上的31對(duì)標(biāo)記,分析其純合度。目前獲得純合度最高的植株可達(dá)到93.5%;另外對(duì)S2代所有樣品的標(biāo)記位點(diǎn)在群體中的純合度情況進(jìn)行了分析,9條染色體中平均純合度最高的為6
3、號(hào)染色體,其次為3號(hào)和5號(hào)染色體。
2.S2代中編號(hào)為34、35、36、48、49的植株已經(jīng)開花,繼續(xù)對(duì)其進(jìn)行自交,獲得自交種子,播種后獲得S3代。
3.對(duì)不同世代間山金柑純合度分析結(jié)果表明,自交后代個(gè)體純合度并不一定高于親代,但其整體純合度呈增加趨勢。隨著其純合度增加,植株生活力表現(xiàn)出下降趨勢,這種現(xiàn)象是否與自交衰退有關(guān)還需進(jìn)一步研究。
4.在2013年和2014年6月至10月期間以單、多胚山金柑花藥為材
4、料,培養(yǎng)花藥10000枚以上,僅有1/2MT+0.1 mg/L NAA+活性炭的培養(yǎng)基上有少量愈傷組織長出。
5.選取12個(gè)不同地區(qū)采集的山金柑株系為材料,對(duì)遺傳轉(zhuǎn)化主要影響因子設(shè)置不同梯度,利用熒光顯微鏡觀察抗性芽,計(jì)算生芽率和陽性率,比較不同處理下山金柑的再生率和轉(zhuǎn)化率。結(jié)果顯示,選用QK、ZQ、GZ等基因型的外植體,黃化苗光培10d左右,共培養(yǎng)后暗培養(yǎng)5-7d,農(nóng)桿菌液OD值在0.7左右,是山金柑較為適宜的遺傳轉(zhuǎn)化條件。
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