轉(zhuǎn)基因煙草細(xì)胞外鈣調(diào)素檢測(cè)及G蛋白在其跨膜信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中的作用.pdf

1、鈣調(diào)素(Calmodulin,CaM)傳統(tǒng)上被認(rèn)為是一種重要的胞內(nèi)Ca<'2+>受體,但近年來人們發(fā)現(xiàn)它不僅在胞外廣泛存在而且還具有多種生物學(xué)功能.例如:促進(jìn)細(xì)胞增殖、花粉萌發(fā)和花粉管伸長(zhǎng)、調(diào)控基因表達(dá)等.但有關(guān)其結(jié)構(gòu)特性和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制還不清楚.該文用Western-blot的方法,利用植物CaM單克隆體從轉(zhuǎn)基因煙草懸浮培養(yǎng)細(xì)胞胞外介質(zhì)中檢測(cè)到CaM的存在,其分子量約為20.5kDa,與胞內(nèi)CaM分子量17kDa存在差異.另外通過細(xì)菌毒

2、素實(shí)驗(yàn)證明,G蛋白激活劑CTX可以促進(jìn)轉(zhuǎn)基因煙草rbcS基因表達(dá),而異三聚體G蛋白抑制劑PTX則抑制rbcS基因表達(dá);同時(shí)證實(shí)PTX可以抑制外源CaM促進(jìn)的rbcS基因表達(dá),而CTX可以恢復(fù)被W<,7>-agarose抑制的rbcS基因表達(dá).這表明在胞外CaM調(diào)控轉(zhuǎn)基因煙草rbcS基因表達(dá)過程中有異三聚體G蛋白的參與.通過提純包埋有GTPase活性測(cè)定熒光底物的質(zhì)膜正向型囊泡,證明外源的CaM可以直接激活質(zhì)膜正向型囊泡的異三聚體G蛋白G