蛹蟲草交配型基因的克隆及其對子實體形成的影響.pdf

1、蛹蟲草（Cordyceps militaris）是一種具有很大市場開發(fā)潛力的藥用真菌，然而，目前在蛹蟲草人工栽培過程中存在著許多問題，如：菌種退化、栽培不出菇或出菇畸形等，這些問題的存在阻礙了蛹蟲草栽培業(yè)的發(fā)展。已有的有關(guān)蛹蟲草的研究，主要集中于培養(yǎng)條件選擇、有效成分分析和藥理作用研究上，對其生物學(xué)特性、遺傳學(xué)等方面的研究仍較薄弱，對其菌株退化的分子遺傳機理的研究更是稀少。
　　 本研究以蛹蟲草同核體菌株a4，a3，a7，a8以

2、及收集到的其它蛹蟲草菌株為材料，根據(jù)交配型基因的序列設(shè)計特異引物，結(jié)合基因組步行的方法，克隆得到蛹蟲草HMG和alpha型交配型基因全長，并初步解析了交配型的缺失與子實體的正常發(fā)育之間的聯(lián)系，同時還研究了蛹蟲草無性孢子萌發(fā)產(chǎn)生的菌株所攜帶的交配型基因類型。
　　 本論文的主要實驗結(jié)果如下：
　　 1.從蛹蟲草同核體菌株a4和a7中分別克隆得到了HMG型交配型基因MAT1-2-1，以及alpha型交配型基因MAT1-1-1

3、與MAT1-1-2的全長。本研究所獲得的alpha型和HMG型交配型基因與NCBI上登錄的同類交配型基因在DNA序列上（登錄號AB194982、AB084257）有很高的相似性（>89％）。MAT1-1-1的全長序列（780bp）為首次報道。
　　 2.根據(jù)蛹蟲草交配型基因的DNA序列設(shè)計特異性引物，對同一菌種蛹蟲草的出菇菌株和不出菇菌株進行交配型基因的特異PCR驗證，結(jié)果顯示，出菇菌株含有兩種類型交配型基因MAT-HMG（MA

4、T1-2-1）和MAT-alpha（MAT1-1-1和MAT1-1-2），而不出菇菌株只含有其中的一種類型交配型基因。這說明不出菇的蛹蟲草菌株發(fā)生了交配型基因的缺失。該研究結(jié)果為使用分子生物學(xué)的方法在蛹蟲草母種生產(chǎn)階段進行正常出菇檢測提供了實驗依據(jù)。
　　 3.在蛹蟲草栽培菌種的菌絲體中發(fā)現(xiàn)無性孢子，對該蛹蟲草菌株的無性孢子進行單孢分離，獲得10株分離菌株。PCR驗證這10株單孢分離菌株及親本菌株的交配型基因類型。結(jié)果顯示，親本