蛹蟲草交配型基因的克隆及其對子實體形成的影響.pdf

1、蛹蟲草（Cordyceps militaris）是一種具有很大市場開發(fā)潛力的藥用真菌，然而，目前在蛹蟲草人工栽培過程中存在著許多問題，如：菌種退化、栽培不出菇或出菇畸形等，這些問題的存在阻礙了蛹蟲草栽培業(yè)的發(fā)展。已有的有關蛹蟲草的研究，主要集中于培養(yǎng)條件選擇、有效成分分析和藥理作用研究上，對其生物學特性、遺傳學等方面的研究仍較薄弱，對其菌株退化的分子遺傳機理的研究更是稀少。
　　 本研究以蛹蟲草同核體菌株a4，a3，a7，a8以

2、及收集到的其它蛹蟲草菌株為材料，根據(jù)交配型基因的序列設計特異引物，結合基因組步行的方法，克隆得到蛹蟲草HMG和alpha型交配型基因全長，并初步解析了交配型的缺失與子實體的正常發(fā)育之間的聯(lián)系，同時還研究了蛹蟲草無性孢子萌發(fā)產生的菌株所攜帶的交配型基因類型。
　　 本論文的主要實驗結果如下：
　　 1.從蛹蟲草同核體菌株a4和a7中分別克隆得到了HMG型交配型基因MAT1-2-1，以及alpha型交配型基因MAT1-1-1

3、與MAT1-1-2的全長。本研究所獲得的alpha型和HMG型交配型基因與NCBI上登錄的同類交配型基因在DNA序列上（登錄號AB194982、AB084257）有很高的相似性（>89％）。MAT1-1-1的全長序列（780bp）為首次報道。
　　 2.根據(jù)蛹蟲草交配型基因的DNA序列設計特異性引物，對同一菌種蛹蟲草的出菇菌株和不出菇菌株進行交配型基因的特異PCR驗證，結果顯示，出菇菌株含有兩種類型交配型基因MAT-HMG（MA

4、T1-2-1）和MAT-alpha（MAT1-1-1和MAT1-1-2），而不出菇菌株只含有其中的一種類型交配型基因。這說明不出菇的蛹蟲草菌株發(fā)生了交配型基因的缺失。該研究結果為使用分子生物學的方法在蛹蟲草母種生產階段進行正常出菇檢測提供了實驗依據(jù)。
　　 3.在蛹蟲草栽培菌種的菌絲體中發(fā)現(xiàn)無性孢子，對該蛹蟲草菌株的無性孢子進行單孢分離，獲得10株分離菌株。PCR驗證這10株單孢分離菌株及親本菌株的交配型基因類型。結果顯示，親本