兔組織工程氣管支架的制備及再血管化研究.pdf

1、因外傷、良性疾病或者惡性疾病造成長(zhǎng)段氣管損傷,必須行氣管移植重建,才可恢復(fù)呼吸道的通暢。氣管移植是長(zhǎng)段氣管修復(fù)的重要手段,是目前研究的熱點(diǎn)。人工氣管和同種異體氣管是氣管移植的主要替代物,但是二者都有自身的缺點(diǎn),不是臨床應(yīng)用的理想氣管替代物。近年來,組織工程同種異體氣管越來越受到人們的關(guān)注,但組織工程同種異體氣管移植體的免疫排斥、再細(xì)胞化和再血管化是制約組織工程氣管發(fā)展的重要因素。其原因是同種異體氣管替代物沒有去除含有強(qiáng)抗原性的氣管粘膜上

2、皮細(xì)胞,和保留無免疫原性的氣管軟骨和細(xì)胞外基質(zhì)。因此需要尋找新方法達(dá)到降低氣管移植的免疫原性,保留細(xì)胞外基質(zhì)以促進(jìn)氣管支架再血管化和再細(xì)胞化。深低溫冷凍法和單純酶洗法是制備同種異體氣管支架的兩種常用方法,但是實(shí)驗(yàn)結(jié)果和臨床應(yīng)用效果并不理想。本實(shí)驗(yàn)通過將深低溫冷凍法和單純酶洗法相結(jié)合的方法探討既能去除同種異體氣管支架氣管粘膜細(xì)胞的抗原性,又能夠保留較多的細(xì)胞外基質(zhì)和生物力學(xué)性能,促進(jìn)移植氣管支架的再血管化和再細(xì)胞化,為組織工程同種異體氣管

3、移植的臨床應(yīng)用提供依據(jù)。
　　目的
　　應(yīng)用單純酶洗法探討制備兔氣管支架的合適周期,并進(jìn)一步探討深低溫冷凍-酶洗法制備兔同種異體氣管支架在降低氣管免疫原性,保留生物力學(xué)性能和再細(xì)胞化、再血管化所需細(xì)胞外基質(zhì)的作用,評(píng)價(jià)深低溫冷凍-酶洗法制備氣管支架同種異體異位移植再血管化的效果,為組織工程同種異體氣管移植研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法
　　1、采用不同周期的單純酶洗法處理兔氣管支架,行組織學(xué)、超微結(jié)構(gòu)以及生物力學(xué)性

4、能的檢測(cè),探討單純酶洗法處理兔氣管支架的最適周期。
　　2、用深低溫冷凍-酶洗法制備兔氣管支架,并與單純酶洗法處理3個(gè)周期和深低溫冷凍法制備的氣管支架進(jìn)行組織學(xué)、超微結(jié)構(gòu)以及生物力學(xué)性能的檢測(cè)的結(jié)果比較。
　　3、將深低溫冷凍-酶洗法制備的兔氣管支架進(jìn)行體內(nèi)同種異體大網(wǎng)膜包裹,觀察移植體氣管新的微血管生成的情況。
　　結(jié)果
　　1、經(jīng)單純酶洗法3個(gè)周期與2、4個(gè)周期制備地兔氣管支架相比,在維持生物力學(xué)性能的前提下

5、,可以較完整的去除氣管粘膜上皮細(xì)胞,且較完整的保留了細(xì)胞外基質(zhì)的完整性。深低溫冷凍-酶洗法與單純酶洗法處理3個(gè)周期、深低溫冷凍法制備的氣管支架,在制備的氣管支架在最大拉伸力、破裂力、變異率等生物力學(xué)方面,無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,即都較好保留生物力學(xué)性能。
　　2、深低溫冷凍-酶洗法與單純酶洗法處理3個(gè)周期制備的氣管支架相比,都可以完整的去除氣管粘膜上皮細(xì)胞,但保留了更多的細(xì)胞外基質(zhì);深低溫冷凍-酶洗法與深低溫冷凍法制備的氣管支架相比,都可以

6、保留較多的細(xì)胞外基質(zhì),但具有更好的去免疫原效果。
　　3、經(jīng)深低溫冷凍-酶洗法制備的兔氣管支架行同種異體大網(wǎng)膜包裹4周后,氣管支架的細(xì)胞外基質(zhì)可見新生的微血管和再生的血管內(nèi)皮細(xì)胞。
　　結(jié)論
　　1、通過單純酶洗法制備的兔氣管支架,經(jīng)過3個(gè)周期與2、4個(gè)周期制備的氣管支架相比,在完全去除氣管粘膜上皮細(xì)胞的同時(shí),保留了較多的細(xì)胞外基質(zhì),是較為理想的制備兔同種異體氣管支架的方法。
　　2、經(jīng)過深低溫冷凍-酶洗法與單純