肝組織工程血管化基礎(chǔ)研究.pdf

1、目的：為了構(gòu)建具有血管化的組織工程肝組織，本題進(jìn)行了以下系列基礎(chǔ)性研究：1、肝組織工程血管化種子細(xì)胞的制備；2、肝血管支架材料相容性及支架血管化研究；3、血管生成的微環(huán)境(細(xì)胞外基質(zhì))研究；4、血管化肝組織塊的構(gòu)建 方法：1.用膠原酶灌注Percoll純化法分離肝竇內(nèi)皮細(xì)胞，肺組織塊貼壁法分離微血管內(nèi)皮細(xì)胞，并進(jìn)行細(xì)胞的鑒定。2.將微血管內(nèi)皮細(xì)胞種植在PLGA和PEG的薄膜上，評價(jià)細(xì)胞與材料相容性。將含內(nèi)管網(wǎng)的可降解PLGA多孔

2、支架的管道內(nèi)皮化后植入小鼠腸系膜間，觀察植入2周、4周后體內(nèi)血管化情況。3、先在加入VEGF165的纖維蛋白立體凝膠中誘導(dǎo)微血管內(nèi)皮細(xì)胞形成血管樣結(jié)構(gòu)，將形成了血管樣結(jié)構(gòu)的纖維蛋白凝膠用多孔塑料薄膜包裹后植入到小鼠腸系膜間，于2周取出觀察凝膠血管化情況及其中的血管樣結(jié)構(gòu)能否能變成有血流的微血管。4、用肝竇內(nèi)皮細(xì)胞對內(nèi)管網(wǎng)多孔可降解PLGA支架的管道進(jìn)行內(nèi)皮化，然后在網(wǎng)管外被覆一層稀薄的肝細(xì)胞和纖維蛋白凝膠混合物，構(gòu)建肝組織塊，分別植入到

3、剝除肝包膜的肝表面和腸系膜間，觀察構(gòu)建的肝組織塊存活和血管化情況。5、本研究中所有細(xì)胞移植均采用性別交叉移植的方法，用FISH法檢測SRY基因?qū)ν庠醇?xì)胞進(jìn)行示蹤。 結(jié)果：1.肺組織塊貼壁法分離得到純度為87.25±1.55％，存活率達(dá)98％以上的微血管內(nèi)皮細(xì)胞。用膠原酶灌注Percoll純化法能分離得到活力為95％的肝竇內(nèi)皮細(xì)胞，95.8±3.39％的肝竇內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)Ⅷ因子。2.PLGA材料與微血管內(nèi)皮細(xì)胞的親和性優(yōu)于PEG，對

4、表面的流體沖擊力的耐受力強(qiáng)；內(nèi)皮化明顯增強(qiáng)內(nèi)管網(wǎng)支架血管化，體外內(nèi)皮化支架中的內(nèi)皮細(xì)胞參與了血管化，內(nèi)皮化的支架管道能與宿主血流相通；支架血管化的進(jìn)程為：血竇→無平滑肌的血管→血管。3、在加入VEGF165的纖維蛋白凝膠中立體培養(yǎng)微血管內(nèi)皮細(xì)胞，誘導(dǎo)形成了血管樣結(jié)構(gòu)；誘導(dǎo)形成的血管樣結(jié)構(gòu)在植入體內(nèi)后形成了微血管。4、體外構(gòu)建的肝組織塊緊貼去包膜的肝面移植形成了血管化的肝組織，而移植至小鼠腸系膜間者則無肝細(xì)胞存活。 結(jié)論：1、采取