JEV NS2B蛋白單克隆抗體的制備及其應(yīng)用.pdf

1、乙型腦炎(Japanese encephalitis)，簡稱乙腦，是由黃病毒科黃病毒屬成員乙型腦炎病毒(Japanese encephalitis virus，JEV)感染所引起的一種危害嚴重的蟲媒性人畜共患病。該病感染人后，多表現(xiàn)為發(fā)熱、惡心、意識障礙等，造成患者死亡或是留下較嚴重的神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥;感染豬群后，則表現(xiàn)為明顯的生殖障礙，造成重大經(jīng)濟損失。但長期以來，乙型腦炎病毒非結(jié)構(gòu)蛋白的功能及其在乙腦致病過程中的作用尚不明確。為此，本

2、研究制備、篩選了抗JEV NS2B蛋白單克隆抗體，并利用該抗體，研究了JEV強弱毒株NS2B蛋白在不同細胞系、不同時間點的表達分布情況，以期為揭示JEV NS2B蛋白的功能開辟新思路。具體研究結(jié)果如下:
　　1.JEV NS2B蛋白單克隆抗體的制備及其抗原表位的初步鑒定。
　　利用原核表達的GST-NS2B蛋白免疫BALB/c小鼠，經(jīng)過細胞融合和間接酶聯(lián)免疫試驗(ELISA)篩選雜交瘤細胞株，得到3株可穩(wěn)定分泌抗NS2B蛋白

3、的特異性單克隆抗體細胞株，分別命名為:1B9、3E12、4E6。Ig亞型分別為: IgG2b、IgG1、IgG1。輕鏈均為Kappa鏈。經(jīng)間接ELISA、間接免疫熒光(IFA)和免疫印跡(Western blot)檢測，這3株單抗均具有較好的特異性和敏感性。
　　在此基礎(chǔ)上，通過構(gòu)建JEV NS2B原核分段表達質(zhì)粒pGEX-KG-NS2B-1(1-201bp)和pGEX-KG-NS2B-2(190-393bp)，得到有4個氨基酸重

4、疊的NS2B截短突變體蛋白，GST-NS2B-1(1-67aa)和GST-NS2B-2(64-131aa)。經(jīng)過間接ELISA和Western blot檢測，發(fā)現(xiàn)上述3株單克隆抗體所識別的抗原表位均位于JEV NS2B蛋白的第68-131位氨基酸。
　　2.JEV強弱毒株NS2B蛋白表達分布比較不同細胞系在感染相同MOI的JEV P3株和SA14-14-2株后，在不同時間點收取細胞樣品，分別提取病毒樣品、RNA樣品和蛋白樣品。比較