人紅細(xì)胞血型糖蛋白B單克隆抗體的制備.pdf

1、1 ， I 1 1 0 2 3 7 7j ：。奐弓一．—— UDC ————～學(xué)位論文學(xué)校代碼一一 密級(jí)?——人紅細(xì)胞血型糖鬣白B 犖克隆抗體的制備高晚飛指導(dǎo)教師姓名：上壁壘整控j 奎墨圣：墊援! 趣型妻望! 鎏蒸墊蜘! ! ! j ! ! !申請(qǐng)學(xué)位級(jí)另} j ：一亟 土一一學(xué)科墊I k ：名稱： 基塑蘭匿荽霉當(dāng)L論文提交日期：一上盟! 生! 笪 論屯笞辯日馴： 呈! ! ! 主! 旦一學(xué)位授予單位。 趣劌叁生學(xué)位授予日期：～——一?

2、一一一答辯委員會(huì)主席·————．一 淪史評(píng)閱人，：2 0 0 7 牟 ：月A B S T R A C TB l o o dg r o u p h a s b e e n d e f i n e da s2 9b l o o ds y s t e m s a n dm o r e t h a n 6 0 0a n t i g e n sO nt h e s u r f a c eo f r e db l o o d c e l

3、l s ，w h i c h p l a y s s i g n i f i c a n tr o l ei nb l o o d t r a n s f u s i o n , m e d i c a le x a m i n a t i o n a n dh e r e d i t a r yd i e a s ed i a g o s i s e ．G l y c o p r o t e i n i so n ec l a s s

4、o f m a i n a n t i g e n sw h i c h C o l l t a i l l sA 、B 、C 、D a n dE ．G l y e n p r o t e i nA ( O P A ) a n dG l y e o p r o t e i nB ( G P B 、b e l o n gt om a i nm o l e c u l a rs i g n sa n dc o n s t i t u t e

5、 sM N S s b l o o dg r o u p ，t h el a t e rh a st w os u b t y p e s ：G P B —S ( 4 8 ％) a n dG P B ·s ( 5 2 ％) ．1 kd i f f e r e n c e b e t w e e nt h e m i st h a tt h e4 8 也a m i n o a c i do f G P B i sM e t i

6、nt h eS a n t i g e n , w h i l e T h r i nt h e Sa n t i g e n ．A n t i - Sa n dA n t i ．sa r e a l lw a r m I g Ga n t i b o d y sw h i c h a l e o f t e n p r o d u c e da f t e rb l o o dt r a n s f u s i o na n dc o

7、 u l dc a n s es e r i o u sh a e m o l y t i c u st r a n s f u s i o n r e s p o n s e ．W eh a v ec l o n e dg e n eG P B sf r o mK 5 6 2c e l l l i n e b yR T - P C R ．S u b e l o n e d i t t 0p T Z 5 7 R ／Tt h e nt o

8、e u k a r y o t i ce x p r e s s i o nv e c t o rp c D N A 3 ．1 - H i s - M y c - A ．T h eC H O c e l lW a sm m s f e c t e d w i t ht h er e c o m b i n a n tp l a s m i d ．t h e ns c r e e n e dw i t hG 4 1 8 ．n 掄s t a

9、 b l eW a n s g e n i c c e l l l i n e i s i d e n t i f i e d 誦t h R T - P C Ra n d W e s t e r nb l o t ．M e a n w h i l e ．w ea m p l i f i e dt h e e x t r a c e l l u a rr e g i o no f G P B s a n dc l o n e di ti

10、n t ot h ep r o k a r y o t i ee x p r e s s i o nv e c t o rp G E X 4 “ 1 “ - 2 ．T h ef u s i o n p r o t e i nG S T - G P B s w a s e x p r e s s e di nt h eE ．c o l iB L 2 1b yi n d u c i n g w i t h I P T G8 w e e k

11、- o l df e m a l e S P F B A L B ／cm i c e w e r ei n u n l l n i z o dw i t h R B C ，t r a n s g e n i cG P B s ·C H O c e l l s a n d p u r i f i e d G S T - G P B s e x t r a c e l h i l a r r e g i o n f u s i o

12、 n p r o t e i n ．S p l e n o c y t c sf r o mt h e i m m u n i z e Am i c e w e r ef u s e d 謝t l lS p 2 J 0m y e l o m a c e l l s ．a(chǎn) n dp o s i t i v e h y b r i d o m ac l o n e s w 眥s c r e e n e db yR B Ch e m a g

13、g i n t i n a t i o nt e s t , E L I S A ,W e s t e r n b l o t , w e a b t a i n e d1 h y b r i d o m a s t r a i nw h i c ha n t ie x t r a c e l l u l a rr e g i o no f G P B ss p e c i a l l y ．T h et i t e r o f s u

14、 p e m a t a n ta n da s c i t i c f l u i dw e r et e s t e db yd i r e c ta n di n d i r e c ta g g l u t i n a t i o n , t h et i t e ro fs u p e r n a t a n t W a s lx 2 6 ，a n d t h et i t e ro f a s e i t i cf l u

15、i dw a s l x 2 1 3 ．T h es u b c l a s s e sa n di s o t y p e sW e r ei d e n t i f i e db Y m o u s em o n o c l o n a la n t i b o d yi s o l y p i n g妣t h e i m l l l u n o l g l o b u l i ns u b c l a s s e so f t h

16、 er n A b i sI g G ．1 1 地m A b a n t i - G P B - sp r o v i d e sa n u s e f u l t o o lf o rt h e s t u d yo f M N S s b l o o d g r o u pa n d t h es e r o l o g i c a l d i a g n o s i s ．K e y w o r d s ：G P B ；e u k