Notch信號通路對神經(jīng)病理性痛的調(diào)控作用.pdf

1、背景：疼痛是醫(yī)學(xué)和生物學(xué)最富挑戰(zhàn)的研究熱點之一，疼痛所引起的生理、心理和社會問題日益受到重視。由軀體感覺神經(jīng)直接損傷或疾病引起的疼痛稱為神經(jīng)病理性疼痛，是臨床最為難治的慢性疼痛之一。目前發(fā)病機制不清，缺乏有效的治療措施。
　　與生理性痛比較，病理性疼痛發(fā)生和持續(xù)慢性化的過程及其復(fù)雜，神經(jīng)系統(tǒng)結(jié)構(gòu)和功能可塑性改變是神經(jīng)病理性痛發(fā)生和發(fā)展得基礎(chǔ)。而廣泛存在于人體的Notch信號通路不僅在中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育過程參與神經(jīng)干細(xì)胞的增殖和分化；

2、在成年動物中也參與膠質(zhì)細(xì)胞的激活、突觸重塑和神經(jīng)再生等神經(jīng)可塑性改變。但是否參與神經(jīng)病理性痛信息的傳遞調(diào)控尚不可知！因此，本課題旨在探討Notch信號通路在神經(jīng)病理性發(fā)生發(fā)展中所扮演的角色，闡明其發(fā)病機制，為神經(jīng)病理性痛的治療提供新的理論依據(jù)。
　　實驗一鞘內(nèi)注射DAPT對神經(jīng)病理性痛大鼠痛行為學(xué)的影響
　　目的：觀察鞘內(nèi)注射Notch信號通路關(guān)鍵酶——γ-分泌酶抑制劑DAPT對神經(jīng)病理性痛大鼠的痛行為學(xué)影響。
　　方

3、法：復(fù)制SNI和CCI兩種神經(jīng)病理性痛模型。Ⅰ.觀察術(shù)前給予DAPT對SNI大鼠機械性痛敏的作用：雄性SD大鼠30只，隨機分為3組（n=10），①Sham組，只暴露坐骨神經(jīng)而不予任何損傷；②SNI+DAPT組，行SNI手術(shù)前30min鞘內(nèi)注射DAPT；③SNI+DMSO，行SNI手術(shù)前30min鞘內(nèi)注射溶劑DMSO。Ⅱ.觀察術(shù)后給予DAPT對SNI大鼠機械性痛敏的作用：雄性SD大鼠20只，隨機分為2組（n=10），①SNI+DAPT,行

4、SNI手術(shù)后3d鞘內(nèi)注射DAPT；②SNI+DMSO，即行SNI術(shù)后3d鞘內(nèi)注射溶劑DMSO；Ⅲ.觀察術(shù)前給藥DAPT對CCI大鼠機械性痛敏和熱痛敏的作用：雄性SD大鼠30只，隨機分為3組（n=10），①Sham組，只暴露坐骨神經(jīng)而不予任何損傷；②CCI+DAPT，即行CCI手術(shù)前30min鞘內(nèi)注射DAPT；③CCI+DMSO組，即行CCI手術(shù)前30min鞘內(nèi)注射溶劑DMSO。Ⅳ.觀察不同劑量DAPT對SNI大鼠機械性痛敏的影響：雄性S

5、D大鼠50只，隨機分為5組（n=10），空白對照組，單純行SNI組，以及SNI+DAPT5、15、50和150?g組。分別于給藥前和給藥后測量大鼠的機械縮足反射閾值和熱縮足反射潛伏期，觀察其痛行為學(xué)的變化。
　　結(jié)果：Ⅰ.與DMSO對照組比較，神經(jīng)損傷前30min鞘內(nèi)注射50?gDAPT組大鼠損傷側(cè)后爪的痛敏水平顯著降低，作用時程長達21天，提示鞘內(nèi)DAPT可一定程度的抑制神經(jīng)病理性痛的發(fā)生；Ⅱ.神經(jīng)損傷后3d鞘內(nèi)注射50?gDA

6、PT可翻轉(zhuǎn)SNI大鼠損傷爪的機械性痛閾降低，但作用時程不超過48小時；采用相同劑量連續(xù)給藥一周（1次/天），其作用強度和時程與單次給藥無明顯差別；提示DAPT鎮(zhèn)痛強度具有―封頂效應(yīng)‖。Ⅲ.DAPT+CCI組大鼠損傷側(cè)后爪熱和機械性痛閾雖低于正常大鼠，但較DMSO+CCI組顯著提高，提示DAPT同樣可有效抑制CCI大鼠的熱和機械痛敏的發(fā)生。Ⅳ.鞘內(nèi)DAPT可翻轉(zhuǎn)SNI大鼠的機械性痛閾降低，且呈劑量依賴性。
　　結(jié)論：鞘內(nèi)注射DAPT

7、可抑制不同神經(jīng)病理性痛大鼠痛敏的發(fā)生和維持，且呈劑量依賴性。
　　實驗二Notch信號分子在傷害性信息傳導(dǎo)通路的表達
　　目的：觀察大鼠神經(jīng)損傷前后Notch信號分子在傷害性信息傳導(dǎo)通路的表達變化，了解Notch信號分子表達變化與神經(jīng)病理性痛之間的關(guān)系。
　　方法：復(fù)制SNI大鼠神經(jīng)病理性痛模型，分別于損傷前，損傷后3d、7d、14d取大鼠坐骨神經(jīng)，L4-5的DRG(背根神經(jīng)節(jié))和L4-5段脊髓，分別進行免疫熒光染色以

8、及Westernblot、Real-TimePCR等方法檢測Notch信號分子的表達變化。
　　結(jié)果：Ⅰ.Notch信號通路活化胞內(nèi)段NICD在成年大鼠坐骨神經(jīng)中有所表達，且損傷后較損傷前表達顯著上調(diào)（P<0.05）。Ⅱ.NICD在DRG中主要表達于肽類神經(jīng)元中，且在神經(jīng)損傷后表達顯著增加（P<0.05）。Ⅲ.NICD在脊髓中主要表達于脊髓背角淺層，且在神經(jīng)損傷后表達顯著增加（P<0.05）。
　　結(jié)論：Notch信號通路的