沙利度胺對(duì)慢性神經(jīng)病理性痛和炎性痛的防治作用及其相關(guān)機(jī)制的研究.pdf

1、研究背景：
　　全球每年約有7％的普通人群飽受慢性疼痛的折磨,嚴(yán)重影響著患者的生活質(zhì)量。但由于對(duì)慢性疼痛的具體發(fā)生發(fā)展機(jī)制迄今仍未完全闡明,因此導(dǎo)致對(duì)其的臨床治療也缺乏突破。近年來(lái),越來(lái)越多的研究發(fā)現(xiàn)脊髓背角的星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞活化及炎性因子的釋放都與慢性疼痛的發(fā)生和發(fā)展有著密切的關(guān)系。因此以膠質(zhì)細(xì)胞活化和炎性反應(yīng)為研究慢性疼痛的新靶點(diǎn),可能為臨床提供更多更有效的治療方法和新的治藥物。
　　當(dāng)外周神經(jīng)受到損傷后,神經(jīng)膠

2、質(zhì)細(xì)胞可以通過(guò)釋放TNF-α等炎性因子,改變神經(jīng)遞質(zhì)清除能力,促進(jìn)痛覺(jué)信息的異常放大,形成痛覺(jué)敏化,通過(guò)抑制膠質(zhì)細(xì)胞的活化,減少促炎因子的釋放則疼痛得到抑制。有研究證實(shí),使用TNF-α的中和抗體或者受體的拮抗劑可以緩解神經(jīng)損傷誘導(dǎo)的慢性疼痛,沙利度胺(Thalidomide,Tha)就是其中之一種。
　　Tha是一種谷氨酸衍生物,具有很好的抗炎和免疫調(diào)節(jié)作用。有研究表明,Tha可以選擇性地抑制單核巨噬細(xì)胞分泌TNF-α,同時(shí)促進(jìn)T

3、NF-α的降解而發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用。最近的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究結(jié)論已經(jīng)證實(shí)了Tha可以緩解外周神經(jīng)系統(tǒng)損傷所導(dǎo)致的慢性疼痛,然而,其參與慢性疼痛的鎮(zhèn)痛機(jī)制尚不完全清楚。
　　綜上,本課題以Tha為工具藥,研究其對(duì)兩種慢性疼痛即神經(jīng)病理性痛和炎性痛是否有鎮(zhèn)痛作用、發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用的方式、預(yù)防和治療的時(shí)間窗以及其發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用的膠質(zhì)細(xì)胞和炎性因子相關(guān)機(jī)制,為進(jìn)一步闡明慢性疼痛的相關(guān)發(fā)生機(jī)制和臨床治療慢性疼痛提供理論依據(jù)。
　　研究方法：
　　

4、本課題分別通過(guò)實(shí)驗(yàn)大鼠脊神經(jīng)結(jié)扎和足底注射福爾馬林的方法制作神經(jīng)病理性痛和炎性疼痛動(dòng)物模型;通過(guò)行為藥理學(xué)方法觀察實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的熱痛敏反應(yīng)潛伏期和機(jī)械性痛覺(jué)異常反應(yīng)潛伏期;并通過(guò)免疫熒光化學(xué)和Western Blot蛋白定量方法觀察脊髓背角相關(guān)細(xì)胞和分子在慢性疼痛過(guò)程中的變化,分別在整體動(dòng)物、細(xì)胞以及分子水平研究和觀察Tha對(duì)慢性痛發(fā)生發(fā)展的作用。
　　研究結(jié)果：
　　第一部分研究?jī)?nèi)容觀察到:
　　(1)在SNL模型建立前

5、即腹腔給予Tha(20 mg/kg)預(yù)處理后,能明顯的抑制由SNL介導(dǎo)的大鼠機(jī)械性痛;
　　(2)在SNL模型建立后第3、5、7、14 d分別Tha(20 mg/kg)干預(yù)能顯著提高大鼠的機(jī)械性縮足閾值;
　　(3)在坐骨神經(jīng)結(jié)扎(Spinal nerve ligation,SNL)模型建立后不同時(shí)間點(diǎn)(0、3、7、14 d)大鼠手術(shù)側(cè)脊髓背角的GFAP和Iba1比假手術(shù)組表達(dá)量明顯增多,但各時(shí)間點(diǎn)腹腔給予Tha(20 mg

6、/kg)膠質(zhì)原纖維酸性蛋白(GFAP)和離子鈣結(jié)合銜接分子1(Iba1)表達(dá)量減少;
　　(4)Western blot結(jié)果顯示SNL所致的神經(jīng)病理性疼痛大鼠脊髓背角腫瘤壞死因子-α(TNF-α)分子在術(shù)后3～14 d表達(dá)增多,然而給予Tha干預(yù)后,表達(dá)量則明顯減少。
　　第二部分研究?jī)?nèi)容觀察到:
　　(1)大鼠足底皮下注射5%福爾馬林50μl后,能引起典型的雙時(shí)相(phaseⅠ、phaseⅡ)自發(fā)痛行為,第一時(shí)相是福

7、爾馬林注射后直接由機(jī)械性刺激損傷組織而引起的急性疼痛,隨后會(huì)出現(xiàn)一個(gè)持續(xù)超過(guò)40 min慢反應(yīng)過(guò)程稱第二時(shí)相,是由注射的福爾馬林引起的炎癥反應(yīng)而導(dǎo)致的持續(xù)疼痛;
　　(2)模型建立前2h經(jīng)灌胃給予布洛芬(20 mg/kg)和不同劑量的Tha(10、20、30 mg/kg)干預(yù)后能夠明顯的抑制福爾馬林介導(dǎo)的大鼠第一時(shí)相和第二時(shí)相的痛行為,布洛芬與各沙利度胺治療組之間沒(méi)有明顯區(qū)別;
　　(3)福爾馬林注射組的脊髓背角內(nèi),Iba1

8、陽(yáng)性小膠質(zhì)細(xì)胞、P物質(zhì)(SP)陽(yáng)性終末以及FOS蛋白的表達(dá)量均增多,而給予不同劑量(10、20、30 mg/kg)的Tha處理組與0.9%生理鹽水治療對(duì)照組相比表達(dá)量呈明顯的下降趨勢(shì);
　　(4)福爾馬林注射組大鼠中腦導(dǎo)水管周?chē)屹|(zhì)(Periaqueductal gray,PAG)腹外側(cè)區(qū)、前扣帶回皮質(zhì)(Anterior cingulate cortex,ACC)、島葉皮質(zhì)(Insular cortex,IC)、前額葉皮質(zhì)(Pre

9、frontal cortex,PFC)等區(qū)域,均有大量的FOS陽(yáng)性神經(jīng)元表達(dá),然而沙利度胺(20 mg/kg)治療組同一區(qū)域內(nèi)的FOS陽(yáng)性神經(jīng)元數(shù)量明顯下降;
　　(5)正常對(duì)照組的Ibal陽(yáng)性小膠質(zhì)細(xì)胞為靜息狀態(tài),主要呈細(xì)長(zhǎng)、分枝狀的細(xì)胞,LPS+生理鹽水組的Ibal陽(yáng)性小膠質(zhì)細(xì)胞為激活狀態(tài),細(xì)胞體積增大、變?yōu)閳A形,甚至呈阿米巴樣的細(xì)胞,而Tha干預(yù)可以減輕LPS刺激對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)的影響,使激活狀態(tài)的細(xì)胞數(shù)量明顯減少;

10、　　(6)LPS+生理鹽水組的GFAP陽(yáng)性細(xì)胞較正常對(duì)照組相比,細(xì)胞胞體變大,突起回縮;而Tha干預(yù)可以減輕LPS刺激對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)的影響;
　　(7)與正常對(duì)照組相比,LPS+生理鹽水組TNF-α、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)和白介素-10(IL-10)的表達(dá)明顯增多,而Tha干預(yù)可以降低TNF-α、IL-1β、和IL-6的表達(dá)量,但對(duì)IL-10的表達(dá)卻沒(méi)有明顯影響。
　　小結(jié)：
　　本研究