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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:大蒜(Allium Sativum L.)是具有數(shù)千年歷史的藥食兩用植物,作為藥材、食品補(bǔ)充劑、草藥列入各國(guó)藥典,但其質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)存在較大差異,特別是中國(guó)藥典中大蒜質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)還存在較大差距。本研究參照國(guó)外藥典對(duì)大蒜質(zhì)量進(jìn)行研究,為2010版《中國(guó)藥典》中大蒜質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)修訂提供參考;根據(jù)國(guó)內(nèi)外公認(rèn)的活性成分群,研究大蒜藥材氨基酸類和含硫化合物類物質(zhì)群 TLC、HPLC指紋圖譜,采用幾種數(shù)學(xué)模式提取與表達(dá)指紋圖譜提供的物質(zhì)群特征
2、成分信息,篩選出能夠?qū)Σ煌[屬植物之間的真?zhèn)巍⒉煌a(chǎn)地大蒜之間的品質(zhì)優(yōu)劣進(jìn)行評(píng)價(jià)的有效方法;探討大蒜微乳薄層鑒別方法,并用于大蒜二維薄層研究,為大蒜薄層鑒別提供新技術(shù)。
方法:
1.采用TLC分別建立大蒜中氨基酸類和含硫化合物類物質(zhì)群薄層指紋圖譜,并對(duì)不同蔥屬植物、不同產(chǎn)地大蒜的物質(zhì)群TLC指紋圖譜進(jìn)行相似度分析、聚類分析、主成分分析、數(shù)值分類法分析,提取與表達(dá)大蒜物質(zhì)群TLC指紋特征。
2.采用HPLC分
3、別建立大蒜中氨基酸類和含硫化合物類物質(zhì)群HPLC指紋圖譜,采用相同的幾種數(shù)學(xué)模型對(duì)兩類物質(zhì)群HPLC指紋圖譜進(jìn)行分析。
3.參照國(guó)外藥典分別建立大蒜薄層鑒別和含量測(cè)定方法,增加水分、總灰分、酸不溶性灰分檢查項(xiàng)。撰寫(xiě)大蒜質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)(草案)及起草說(shuō)明。
4.采用微乳薄層鑒別大蒜中氨基酸,并用于大蒜二維薄層。
結(jié)果:
1.大蒜氨基酸類和含硫化合物類物質(zhì)群 TLC指紋圖譜的條件分別為正丁醇:冰醋酸:水=4:
4、1:1和甲苯:乙酸乙酯=10:3,各化合物群得到有效分離。但各種數(shù)學(xué)方法對(duì)特征成分提取后未能有效分類。
2.大蒜氨基酸類化合物采用異硫氰酸苯酯衍生化,18種氨基酸均達(dá)到有效分離;含硫化合物類物質(zhì)在1%甲酸-甲醇梯度洗脫條件下獲得10個(gè)有效分離色譜峰;各種數(shù)學(xué)方法提取數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,氨基酸類物質(zhì)群夜相指紋圖譜的數(shù)學(xué)表達(dá)未能將大蒜和其它蔥屬植物有效區(qū)分,但含硫化合物類物質(zhì)群液相指紋圖譜的數(shù)學(xué)表達(dá)可有效區(qū)分大蒜和其它蔥屬植物,且數(shù)值分
5、類數(shù)學(xué)模型可以用于大蒜品質(zhì)優(yōu)劣的比較。
3.分別以潛在大蒜辣素、蒜氨酸和精氨酸為指標(biāo)成分建立了質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中薄層鑒別和含量測(cè)定方法;建立水分測(cè)定方法,規(guī)定含水量不超過(guò)65.0%;規(guī)定以干重計(jì)算,蒜氨酸、精氨酸、大蒜辣素含量分別不少于1.5%、1.0%、0.60%。
4.大蒜微乳薄層鑒別最佳條件為20%SDS-正丁醇–正己烷(3.0g-17.3ml-3.0ml)-水微乳液展開(kāi)系統(tǒng);大蒜二維薄層鑒別以有機(jī)展開(kāi)劑-微乳展開(kāi)劑展
6、開(kāi)方式,各成分得到有效分離。
結(jié)論:
1.針對(duì)大蒜富含硫化物物質(zhì)成分及具有特殊酶體系的特點(diǎn),根據(jù)國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀,將酶滅活的氨基酸系統(tǒng)和酶激活的含硫化合物系統(tǒng)作為研究的活性物質(zhì)群是合理的。建立的薄層和液相色譜條件可以分離大蒜中的氨基酸類物質(zhì)和含硫化合物類物質(zhì),指紋圖譜的建立和方法學(xué)驗(yàn)證符合指導(dǎo)原則。
2.采用常用的幾種數(shù)學(xué)模式對(duì)指紋圖譜共有信息進(jìn)行提取和表達(dá),發(fā)現(xiàn)不同產(chǎn)地大蒜的氨基酸類物質(zhì)群有高度相似性,且與
7、同屬植物也有一定相似性,但采用氨基酸類物質(zhì)群的指紋特征不足以對(duì)大蒜進(jìn)行區(qū)分。
3.特征性蒜酶參與反應(yīng)后產(chǎn)生的含硫化合物指紋圖譜可以有效區(qū)分大蒜與其它蔥屬植物,甚至可以區(qū)分不同產(chǎn)地的大蒜,并可用于品質(zhì)優(yōu)劣的評(píng)價(jià),有效區(qū)分大蒜與其它種植物應(yīng)采用大蒜酶激活系統(tǒng)中含硫化合物的HPLC指紋特征。
4.若要對(duì)氨基酸類物質(zhì)群指紋圖譜進(jìn)行有效區(qū)分,應(yīng)該提取指紋圖譜中的差異特征信息,采用適當(dāng)?shù)臄?shù)學(xué)模型或建立可行的數(shù)學(xué)模型對(duì)差異性信息進(jìn)
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