白色念珠菌基因CaTCO89和CaPTC1的鑒定及功能研究.pdf

1、白色念珠菌是臨床上一種最重要的條件致病真菌。目前，人們對白色念珠菌的研究主要集中在弄清其致病機(jī)理和發(fā)現(xiàn)新的藥物作用靶點。通過用釀酒酵母基因編碼的氨基酸序列對斯坦福大學(xué)白色念珠菌基因組數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比對，本研究得到白色念珠菌基因CaTCO89和CaPTC1的序列。基因CaTCO89的ORF長為2127 bp，編碼708個氨基酸。CaTCO89與釀酒酵母ScTCO89所編碼蛋白氨基酸序列的相似性為27.5％。發(fā)現(xiàn)CaTCO89基因可以互補(bǔ)ScT

2、CO89在雷帕霉素和氯化鋰抗性以及保持細(xì)胞壁完整性方面的功能。 本文以白色念珠菌菌株RM1000為背景，構(gòu)建了CaTCO89的雙缺失菌株TJU4(tco89/tco89)。與RM1000相比，TJU4對雷帕霉素和氯化鋰的敏感性增加。在TJU4細(xì)胞中異位表達(dá)CaTCO89基因能夠恢復(fù)TJU4對雷帕霉素抗性到野生型水平，然而卻顯著增強(qiáng)TJU4細(xì)胞對氯化鋰和過氧化氫的抗性以及對Cd2+的敏感性。此外，在Spider和SD-Ura液體培

3、養(yǎng)基中，CaTCO89基因在TJU4中的異位表達(dá)能引起細(xì)胞凝集形成絮狀沉淀。在Spider固體培養(yǎng)基上，TJU4的菌落形態(tài)與野生型菌株相同，為邊緣不整齊扁平狀、表面凸凹不平，且有周邊菌絲形成，但是異位表達(dá)CaTCO89的TJU4菌落形態(tài)表現(xiàn)為表面光滑的面包狀。 基因CaPTC1的ORF長度為1128 bp，編碼375個氨基酸，與釀酒酵母ScPtc1p的相似性為52％。CaPTC1的雙缺失菌株SYY4(ptc1/ptc1)對Li+