BDNF和bFGF對全腦缺血再灌注大鼠內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞的影響.pdf

1、目的：探討B(tài)DNF和bFGF對全腦缺血再灌注大鼠內(nèi)源性NSCs增殖、遷移和分化的影響。
　　 方法：選用體重在250～300g的健康雄性SD大鼠,隨機(jī)分為假手術(shù)組(A)12只、模型組(B)、BDNF治療組(C)、bFGF治療組(D)、BDNF和bFGF聯(lián)合治療組(E)(各24只)。B組大鼠制作全腦缺血再灌注模型,C、D、E組大鼠在全腦缺血再灌注模型基礎(chǔ)上側(cè)腦室注射BDNF、bFGF、BDNF和bFGF混合液,假手術(shù)組大鼠不進(jìn)行模

2、型制作,側(cè)腦室注射同劑量的生理鹽水。首先側(cè)腦室插管并固定,建立給藥途徑;一周后,采用Pulsinelli法(閉合大鼠四條動脈)制作全腦缺血再灌注模型,模型制作前30分鐘給藥一次,以后隔天給藥一次,每次5微升(0.1μg/μl)。分別于全腦缺血再灌注后3d、7d、11d、15d取腦,處死前1天腹腔注射BrdU標(biāo)記液。HE染色觀察大鼠海馬、皮質(zhì)神經(jīng)元的形態(tài)學(xué)改變;免疫組織化學(xué)方法動態(tài)檢測大鼠腦海馬、皮質(zhì)BrdU和Nestin的表達(dá);利用RT

3、-PCR技術(shù)半定量檢測大鼠腦NSE mRNA的表達(dá)。統(tǒng)計(jì)結(jié)果應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(-x±s)表示,兩樣本之間均數(shù)比較采用,檢驗(yàn),P＜0.05具有顯著性差別。
　　 結(jié)果:
　　 (1)HE染色:假手術(shù)組海馬、皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)正常,數(shù)量多,排列整齊。模型組神經(jīng)細(xì)胞稀疏,細(xì)胞間隙增大,并可見大量細(xì)胞變性壞死,表現(xiàn)為胞體皺縮,核固縮深染,核仁消失:而C、D、E組神經(jīng)細(xì)胞存活數(shù)量增多

4、,損傷程度減輕。
　　 (2)免疫組織化學(xué):假手術(shù)組大鼠海馬、皮質(zhì)區(qū)很少見到陽性細(xì)胞表達(dá);與假手術(shù)組相比手術(shù)各組大鼠腦海馬和皮質(zhì)的BrdU和Nestin陽性細(xì)胞均在全腦缺血再灌注3d后開始顯著增加,模型組7d達(dá)到高峰,BDNF治療組、bFGF治療組和BDNF+bFGF治療組11d達(dá)到高峰,隨后開始逐漸下降;與模型組相比缺血后各時間點(diǎn),BDNF治療組、bFGF治療組、BDNF和bFGF聯(lián)合治療組BrdU和Nestin陽性細(xì)胞數(shù)明顯

5、增加(P＜0.05):BDNF治療組和bFGF治療組組間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);與BDNF治療組、bFGF治療組相比缺血后各時間點(diǎn),BDNF和bFGF聯(lián)合治療組BrdU和Nestin陽性細(xì)胞數(shù)增加更明顯(P＜0.05)。
　　 (3)RT-PCR:B、C、D、E各組NSE mRNA表達(dá)11d前沒有明顯變化,第15d表達(dá)有所增加,僅bFGF治療組、BDNF和bFGF聯(lián)合治療組增加具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。