姜黃素對(duì)高糖誘導(dǎo)的H9C2心肌細(xì)胞炎癥的保護(hù)作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　1、觀察高糖對(duì)H9C2心肌細(xì)胞生物活性的影響。
　　2、觀察姜黃素對(duì)高糖誘導(dǎo)的H9C2心肌細(xì)胞的生物活性、炎癥反應(yīng)的影響。
　　3、探討姜黃素抑制高糖誘導(dǎo)的H9C2心肌細(xì)胞炎癥反應(yīng)的機(jī)制。
　　方法：
　　1、體外正常糖培養(yǎng)H9C2心肌細(xì)胞，再分別用高糖、姜黃素、肝X激動(dòng)劑/抑制劑、TLR抑制劑、PP2A抑制劑進(jìn)行干預(yù)。
　　2、實(shí)驗(yàn)分組：①Control組：正常對(duì)照組，用正常糖培養(yǎng)基（5

2、.5mmol/L）培養(yǎng)H9C2細(xì)胞；②HG組：陽(yáng)性對(duì)照組，用高糖培養(yǎng)基（33mmol/L）培養(yǎng)H9C2細(xì)胞；③HG+T0901317組：對(duì)HG組用肝X激動(dòng)劑（T0901317終濃度20μmol/L）進(jìn)行干預(yù)；④HG+TAK-242組：對(duì)HG組用TLR抑制劑（TAK-242終濃度100nmol/L）進(jìn)行干預(yù)；⑤HG+Curcumin組：對(duì)HG組用姜黃素（Curcumin終濃度10μmol/L）進(jìn)行干預(yù)；⑥HG+5CPPSS-50組：對(duì)HG

3、組用肝X抑制劑（5CPPSS-50終濃度15μmol/L）進(jìn)行干預(yù)；⑦HG+5CPPSS-50+Curcumin組：在HG+5CPPSS-50組的基礎(chǔ)上加用Curcumin進(jìn)行干預(yù)；⑧HG+Okadaic acid組：對(duì)HG組用PP2A抑制劑（Okadaic acid終濃度20nmol/L）進(jìn)行干預(yù)；⑨HG+Okadaic acid+Curcumin組：在HG+Okadaic acid組的基礎(chǔ)上加用Curcumin進(jìn)行干預(yù)。
　　

4、3、相應(yīng)組中加入相應(yīng)藥物干預(yù)72h后，用CCK-8檢測(cè)各組H9C2心肌細(xì)胞的生長(zhǎng)狀況；ELISA試劑盒測(cè)各組炎癥因子（IL6、TNFα、MCP1）分泌量；同時(shí)應(yīng)用qRT-PCR檢測(cè)各組LXRα、IRAK4、PP2AcmRNA水平；Western blot檢測(cè)各組NF-κB p65(總量和核內(nèi))、LXRα、IRAK4、p-PP2Ac蛋白的表達(dá)并比較。
　　結(jié)果：
　　1、CCK-8檢測(cè)各組H9C2心肌細(xì)胞的生長(zhǎng)狀況結(jié)果顯示：高

5、糖可使細(xì)胞增殖活力下降，LXRs激動(dòng)劑、TLR抑制劑、姜黃素可以減輕高糖對(duì)H9C2心肌細(xì)胞增殖活力的抑制，而LXRs抑制劑或PP2A抑制劑干預(yù)后細(xì)胞增殖活力抑制加劇。在LXRs抑制劑或PP2A抑制劑干預(yù)的基礎(chǔ)上使用姜黃素不能改善高糖對(duì)H9C2心肌細(xì)胞增殖活力的抑制。
　　2、ELISA法檢測(cè)各組細(xì)胞上清中炎癥因子（IL6、TNFα、MCP1）的分泌量，結(jié)果表明：高糖作用下細(xì)胞培養(yǎng)上清中炎癥因子含量明顯增高（P<0.05）。T090

6、1317、TAK-242、Curcumin干預(yù)后炎癥因子分泌量減少（P<0.05）。5CPPSS-50或Okadaic acid加劇炎癥因子釋放（P<0.05）。相對(duì)HG+Curcumin組，在LXRs抑制劑或PP2A抑制劑干預(yù)的基礎(chǔ)上使用Curcumin不能降低炎癥因子含量（P<0.05）。
　　3、qRT-PCR檢測(cè)各組LXRα、IRAK4、PP2Ac mRNA水平：高糖可使LXRαmRNA水平輕微上升，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0

7、.05），而IRAK4和PP2Ac mRNA明顯上調(diào)（P<0.01）。與 HG組相比：HG+T0901317組、HG+TAK-242組、HG+Curcumin組LXRα mRNA進(jìn)一步上調(diào)（P<0.01），IRAK4 mRNA則明顯下降（P<0.01）；HG+5CPPSS-50組結(jié)果提示LXRα mRNA明顯受到抑制（P<0.01），IRAK4 mRNA進(jìn)一步上調(diào)（P<0.01）。在LXRs抑制劑干預(yù)的基礎(chǔ)上使用Curcumin不能發(fā)揮

8、Curcumin上調(diào)LXRα mRNA水平的作用。另外與HG組相比還表明：PP2A抑制劑干預(yù)將進(jìn)一步明顯上調(diào)PP2Ac mRNA水平（P<0.01），Curcumin干預(yù)則可以明顯下調(diào)PP2Ac mRNA水平（P<0.01），而在PP2A抑制劑干預(yù)的基礎(chǔ)上使用Curcumin將明顯減弱Curcumin下調(diào)PP2Ac mRNA水平的作用。
　　4、Western blot檢測(cè)各組NF-κB p65(總蛋白和核內(nèi)組分)、LXRα、IR

9、AK4、p-PP2Ac蛋白的表達(dá)結(jié)果：各組NF-κB p65總蛋白表達(dá)無(wú)明顯差異（P>0.05）。高糖可使LXRα蛋白表達(dá)水平輕微上升，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05），而胞核內(nèi)NF-κB p65、IRAK4和p-PP2Ac蛋白表達(dá)明顯上調(diào)（P<0.01）。與HG組相比：HG+T0901317組、HG+TAK-242組、HG+Curcumin組LXRα蛋白表達(dá)則進(jìn)一步上調(diào)（P<0.05），IRAK4蛋白和胞核內(nèi)NF-κB p65蛋白表達(dá)則

10、明顯下降（P<0.05）；HG+5CPPSS-50組結(jié)果提示LXRα蛋白表達(dá)受到抑制（P<0.05），IRAK4蛋白和胞核內(nèi)NF-κB p65蛋白表達(dá)進(jìn)一步上調(diào)（P<0.01）。在LXRs抑制劑干預(yù)的基礎(chǔ)上使用Curcumin不能發(fā)揮Curcumin上調(diào)LXRα蛋白表達(dá)、抑制NF-κB p65入核的作用。另外，與 HG組相比較還表明：PP2A抑制劑干預(yù)將進(jìn)一步上調(diào)p-PP2Ac、胞核內(nèi)NF-κB p65蛋白含量（P<0.05），Curc

11、umin干預(yù)則可以明顯下調(diào)p-PP2Ac蛋白表達(dá)（P<0.01），而在PP2A抑制劑干預(yù)的基礎(chǔ)上使用Curcumin將明顯減弱Curcumin下調(diào)p-PP2Ac表達(dá)、抑制NF-κB p65入核的作用。
　　結(jié)論：
　　1、高糖可誘導(dǎo)H9C2心肌細(xì)胞發(fā)生炎癥反應(yīng)，姜黃素可以抑制高糖誘導(dǎo)的H9C2心肌細(xì)胞炎癥反應(yīng)。
　　2、姜黃素能夠上調(diào)LXRα表達(dá)，還可以抑制IRAK4、p-PP2Ac表達(dá)，活化PP2A負(fù)性調(diào)控TLR-N