2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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1、原發(fā)性肝癌之所以死亡率高,缺乏早期診斷是主要原因之一,而已有的AFP在肝癌診斷上只有60%左右的陽性率。如果能找到相對(duì)肝癌特異的蛋白和基因單獨(dú)或與AFP聯(lián)合檢測(cè),將會(huì)對(duì)研究肝癌的發(fā)病機(jī)制以及提高早期診斷有重要的意義。目前研究發(fā)現(xiàn)人類癌抗原(Human Carcinoma Antigen,HCA)作為一種糖蛋白復(fù)合物在癌癥中廣泛表達(dá),其蛋白成分具有腫瘤相對(duì)特異性。尋找特異性的肝癌相關(guān)的HCA分子為提高原發(fā)性肝癌的早期檢出率以及了解肝癌的生

2、物學(xué)行為和靶向治療提供了新線索和新依據(jù)。 總的來說,某些腫瘤能產(chǎn)生和分泌粘蛋白,而正常組織不產(chǎn)生。人類癌抗原(Human Carcinoma Antigen,HCA)就是一種分子量很大的粘蛋白樣糖蛋白,它在人腫瘤組織或腫瘤患者的體液以及血液中高表達(dá)。因此,腫瘤患者體內(nèi)表達(dá)上調(diào)的HCA可以作為腫瘤的標(biāo)志物。文獻(xiàn)報(bào)道它能夠被其鼠類同源物epiglycanin(EPGN)的抗體HAE3識(shí)別。但是目前HCA的組成成分和功能未知,而且其抗

3、體亞類為IgM,不能滿足將來臨床應(yīng)用的需要。另一方面HCA在肝癌組織上有無表達(dá)尚無文獻(xiàn)報(bào)道。所以本實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用從腫瘤組織和腫瘤細(xì)胞系中純化的HCA作為免疫原免疫balb/C小鼠,制備出高親和力、高特異性并且針對(duì)不同抗原結(jié)合位點(diǎn)的鼠抗人HCA單克隆抗體。然后用正常肝組織,肝癌組織,肝癌細(xì)胞系HepG2和前列腺癌細(xì)胞系PC3的總蛋白對(duì)獲得的抗體進(jìn)行Western-blot和免疫組化的篩選,篩選出21株單克隆抗體能特異性識(shí)別腫瘤組織或腫瘤細(xì)胞系

4、中的蛋白;發(fā)現(xiàn)其中抗HCA抗體(BCE075)所識(shí)別的抗原在肝癌組織中表達(dá)上調(diào),陽性染色定位于毛細(xì)膽管及小葉間膽管形成的類腺管樣結(jié)構(gòu),BCD021在肝癌組織和HepG2中陽性表達(dá),正常肝組織與正常肝細(xì)胞L-02不表達(dá),陽性染色定位于肝癌細(xì)胞。并且這兩株抗體與目前臨床上常用的糖蛋白類腫瘤標(biāo)志物之間無交叉反應(yīng),推測(cè)它們識(shí)別的為一新的肝癌相關(guān)抗原。進(jìn)一步的我們應(yīng)用免疫沉淀聯(lián)合質(zhì)潛技術(shù)鑒定其抗原,初步認(rèn)定單克隆抗體BCD021識(shí)別的抗原為Cyt

5、oskeleton-associated protein4(CKAP4),單克隆抗體BCE075識(shí)別的抗原可能為CKAP4與Brain glycogen phosphorylase(PYGB)等的復(fù)合物。并對(duì)此進(jìn)行了初步驗(yàn)證。 一、抗HCA單克隆抗體的制備和鑒定: 目的:運(yùn)用雜交瘤技術(shù)制備HCA的IgG單克隆抗體,為進(jìn)一步研究HCA的結(jié)構(gòu)及功能提供有力的工具。并對(duì)單克隆抗體在尋找腫瘤標(biāo)志物的應(yīng)用上進(jìn)行評(píng)價(jià)。 方法

6、:用現(xiàn)有的HCA-IgM抗體HAE3分別從PC3、PCaT及LCaT總蛋白中分離純化得到三組糖蛋白復(fù)合物組分作為抗原分別免疫Balb/c小鼠,獲得鼠抗人HCA抗體,并對(duì)這些抗體進(jìn)行ELISA效價(jià)檢測(cè)、western-blot以及與其它糖蛋白標(biāo)志物的交叉反應(yīng)等分析,篩選合適的抗體進(jìn)行下一步研究。 結(jié)果:共制備出62株高親和力、高特異性并且針對(duì)不同抗原結(jié)合位點(diǎn)的鼠抗人HCA單克隆抗體。而且無論效價(jià)、western-blot等都適合進(jìn)

7、行進(jìn)一步研究。 結(jié)論:我們利用天然HCA抗原制備了高親和力,高特異性并且針對(duì)不同抗原結(jié)合位點(diǎn)的單克隆抗體。上述抗體的一般特性符合我們的要求,可應(yīng)用于蛋白結(jié)構(gòu)、定位、功能等常規(guī)的生命科學(xué)研究,為我們研究其結(jié)構(gòu)及功能提供了有力的特異的工具。 二、抗HCA單克隆抗體在肝細(xì)胞癌以及膽管細(xì)胞癌上的應(yīng)用: 目的:本部分試驗(yàn)主要檢驗(yàn)肝細(xì)胞癌以及膽管細(xì)胞癌有無HCA的表達(dá)。 方法:利用62株HCA單抗在肝癌組織以及細(xì)胞系

8、再次western-blot以及免疫組化篩選單抗,發(fā)現(xiàn)BCD21與BCE075兩株抗體特異性強(qiáng),我們著重將這兩株抗體分別在60例肝細(xì)胞癌以及膽管細(xì)胞癌中進(jìn)行western-blot或者免疫組化分析。 結(jié)果:通過上述方法篩選出的20余株HCA單抗在肝癌中高表達(dá),其中以BCD021與BCE075作為代表,BCE075所識(shí)別的抗原是一組糖蛋白復(fù)合物,在肝癌組織中表達(dá)上調(diào),陽性染色定位于毛細(xì)膽管及小葉間膽管形成的類腺管結(jié)構(gòu)。BCD021

9、所識(shí)別的抗原是糖蛋白復(fù)合物組分中的一種蛋白,在肝癌組織和HepG2細(xì)胞中陽性表達(dá),正常肝組織和L-02細(xì)胞不表達(dá),陽性染色定位于肝癌細(xì)胞。BCE075在膽管細(xì)胞癌上表達(dá)上調(diào),表現(xiàn)在膽管細(xì)胞形成的腺管以及腺腔分泌物上。 結(jié)論:通過Western-blot及免疫組織化學(xué)分析,我們篩選到2株抗體(BCD021及BCE075)識(shí)別的抗原在肝癌組織中表達(dá)上調(diào)。從而為進(jìn)一步研究肝癌相關(guān)HCA抗原的結(jié)構(gòu)及功能奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ),同時(shí)為發(fā)現(xiàn)新的肝

10、癌相關(guān)抗原提供了新線索。 三、肝細(xì)胞癌相關(guān)HCA分子的鑒定與驗(yàn)證: 目的:本部分試驗(yàn)主要鑒定肝細(xì)胞癌相關(guān)王:ICA的組成部分以及進(jìn)行初步的驗(yàn)證。 方法:利用兩株HCA單克隆抗體BCD021以及BCE075從肝癌組織和肝癌細(xì)胞中進(jìn)行免疫沉淀和質(zhì)譜檢測(cè),并對(duì)質(zhì)譜檢測(cè)出來的蛋白進(jìn)一步驗(yàn)證。(Western-blot、免疫沉淀等) 結(jié)果:免疫沉淀與質(zhì)譜檢測(cè)初步證實(shí)了單克隆抗體BCD021識(shí)別的抗原為Cytoske

11、leton-associated protein4(CKAP4),單克隆抗體BCE075識(shí)別的抗原可能為CKAP4與Brain glycogen phosphorylase(PYGB)等的復(fù)合物。PCR以及免疫組化發(fā)現(xiàn)CKAP4在肝癌組織中高表達(dá),正常組織中低表達(dá)。通過免疫沉淀等方法證實(shí)了CKAP4是肝癌相關(guān)HCA的一個(gè)重要組分。 結(jié)論:通過單克隆抗體技術(shù)以及免疫沉淀聯(lián)合質(zhì)譜技術(shù)尋找腫瘤相關(guān)分子是可行的。 小結(jié):本試驗(yàn)通

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