丙戊酸鈉對放射神經(jīng)損傷的保護機制研究及胃癌綜合治療循證探討.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本文從以下幾部分進行論述:
  第一章 斑馬魚放射腦損傷模型的建立
  目的:利用新型模式生物建立斑馬魚放射腦損傷模型,并探討其相關(guān)的放射損傷改變。
  方法:3-6個月大小的160只成年斑馬魚隨機平均分配到2組,一組為正常對照組,一組為照射組,照射組給予單次劑量20Gy的頭部照射。利用Tune1染色觀察腦組織受照射后6h、24h和72h的凋亡情況;利用實時熒光定量PCR的方法檢測斑馬魚腦組織P53、P21、BBC3等

2、基因在照射后6h、24h和72h表達變化;利用實時熒光定量PCR的方法檢測斑馬魚腦組織中炎癥相關(guān)因子腫瘤壞死因子(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)、環(huán)氧化酶-2(COX-2)和可誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶-2(INOS2)等在照射以后6h、12h、24h和72h的表達變化;利用蛋白免疫印跡的方法檢測P53蛋白在照射后72h的表達情況;利用商品試劑盒檢測氧化應(yīng)激相關(guān)指標活性氧簇(ROS)、脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(S

3、OD)、谷胱甘肽(GSH)在照射后6h、12h、24h和72h的變化情況;利用開放場檢測實驗及探索功能檢測實驗,觀察斑馬魚照射一個月后的行為學(xué)改變。
  結(jié)果:放射導(dǎo)致斑馬魚腦組織出現(xiàn)凋亡細胞增多,照射組的凋亡細胞在6h,24h,72h分別為(62.83±6.37)、(39.33±4.89)和(21.17±3.06)個/視野,正常組的凋亡細胞為(2.00±1.41)個/視野,凋亡細胞最高峰出現(xiàn)在照射后6h,與正常對照組相比具有統(tǒng)計

4、學(xué)意義(F=263.793,P<0.001)。放射導(dǎo)致斑馬魚凋亡相關(guān)基因P53的表達增多(F=113.815,P<0.001)、P21的表達也增多(F=128.551,P<0.001)、BBC3的表達水平也增多(F=65.483,P<0.001),與正常對照組相比具有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義。放射導(dǎo)致斑馬魚促炎癥相關(guān)基因TNF-α的表達水平增多(F=25.575,P<0.001)、IL-1β的表達水平也增多(F=12.012,P=0.002)、

5、COX-2的表達水平也增加(F=19.238,P=0.001)、INOS2的表達水平也增多(F=15.026,P=0.001),與正常對照組相比均具有統(tǒng)計學(xué)意義。放射導(dǎo)致ROS的產(chǎn)生增多(F=11.067,P<0.001)、并且脂質(zhì)過氧化物丙二醛MDA的水平也增加(F=104.578,P<0.001),同時降低了GSH的水平(F=651.864,P<0.001)及SOD的活力(F=67.704,P<0.001)。放射還導(dǎo)致斑馬魚在開放場

6、的檢測中出現(xiàn)游動距離減少(正常組versurs照射組=(1865.99±389.22) cm versus(948.05±203.19)cm,t=6.611,P<0.001)、游動速度減少(正常組versurs照射組=(6.22±1.30) cm/s versus(3.17±0.67)cm/s,t=6.606,P<0.001)、運動時間減少(正常組versurs照射組=(257.63±23.51)s versus(219.73±36.6

7、0)s,t=2.755,P=0.013)及探索能力的減弱(正常組versurs照射組=(5.84±1.59) min versus(15.15±4.41)min,t=-6.276,P<0.001),與正常對照組相比具有統(tǒng)計學(xué)意義。
  結(jié)論:利用成年斑馬魚可以成功復(fù)制放射腦損傷模型,其模型與其他動物放射腦損傷模型有類似的發(fā)病機制。
  第二章 丙戊酸鈉對腦及神經(jīng)放射損傷的保護機制研究
  目的:放射誘導(dǎo)產(chǎn)生的活性氧簇(

8、ROS)對正常組織的損傷起著一個非常重要的作用。我們應(yīng)用斑馬魚的腦組織和耳蝸聽神經(jīng)細胞(HEI-0C1)研究丙戊酸鈉(VPA)在放射腦及神經(jīng)損傷中的作用。
  方法:本研究應(yīng)用來干預(yù)放射誘導(dǎo)的斑馬魚損傷及耳蝸毛細胞損傷。觀察VPA處理對全身照射后斑馬魚的生存率的影響。采用了westernblot及RT-PCR檢測抗氧化通路Nrf2/HO-1的蛋白水平及基因水平的變化。利用開放場實驗及探索功能檢測實驗檢測了斑馬魚在照射后一個月的行為

9、學(xué)改變。毛細胞的活力在單獨應(yīng)用丙VPA或VPA聯(lián)合照射的情況下都進行了檢測。利用RNA干擾處理了耳蝸毛細胞的Nrf2,研究其在缺失Nrf2基因的情況下的VPA的作用機制。實驗數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差描述,完全隨機設(shè)計資料的方差分析(One-Way ANOVA)用于比較多組樣本均數(shù)的比較,生存分析采用logRank檢驗。P<0.05認為具有統(tǒng)計學(xué)意義。
  結(jié)果:VPA提高了全身致死劑量照射的斑馬魚的存活率(300mg/kg VPA其存活

10、率為76.67%,100mg/kg VPA其存活率為56.7%),與照射組相比具有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(log rank test x2=70.371 P<0.001)。在斑馬魚腦組織中,VPA干預(yù)減少了放射誘導(dǎo)的ROS(F=421.159,P<0.001)和MDA(F=1797.790,P<0.001)的產(chǎn)生,提高了GSH的水平(F=18667.751,P<0.001)及SOD的活力(F=2514.697,P<0.001),與照射組相比具

11、有統(tǒng)計學(xué)意義。VPA治療激活了Nrf2/H0-1通路,增加了Nrf2蛋白的核內(nèi)轉(zhuǎn)移及提高了HO-1的基因(F=2187.762,P<0.001)和蛋白水平,對放射誘導(dǎo)的正常組織損傷起到保護作用。在缺失Nrf2基因的耳蝸毛細胞中,VPA不能起到放射損傷的保護作用(應(yīng)用VPA與不應(yīng)用VPA其細胞活力:(40.09±1.76)% versus(41.14±1.09)%,t=-0.877,P=0.430))。VPA還提高了斑馬魚放射腦損傷之后的

12、游動距離(正常組、照射組與VPA治療組:(2058.08±551.05) cm versus(973.33±216.70)cm versus(1463.80±201.80) cm,F=23.171,P<0.001)、游動速度(6.86±1.84) cm/s versus(3.24±0.72) cm/sversus(4.88±0.67)cm/s,F(xiàn)=23.171,P<0.001))、提高了探索能力(5.74±1.42)min versus

13、(16.39±4.03)min versus(7.18±1.79)min,F=16.453,P<0.001)。
  結(jié)論:VPA對腦及神經(jīng)的放射損傷起到保護作用,主要是通過激活Nrf2/H0-1通路起作用的。
  第三章 胃癌術(shù)中放療的療效分析
  目的:本研究主要是統(tǒng)計比較胃癌術(shù)中進行放療(實驗組)與未進行放療(對照組)的療效分析。
  方法:通過檢索Pubmed,EMBASE和cochranelibrary數(shù)

14、據(jù)庫,納入關(guān)于術(shù)中放療與術(shù)中未進行放療的對胃癌的治療的效果進行比較的文獻,主要研究胃癌的總生存率(OS)和局部控制率在實驗組中與對照組中的療效。檢索的文獻為的2014年7月以前的發(fā)表文獻。發(fā)表偏倚用倒漏斗圖進行評估。
  結(jié)果:在各個分期的胃癌中,實驗組與對照組在總生存率上比較未具有明顯的統(tǒng)計學(xué)意義(Hazard ratio(HR)=0.84,95% confidence interval(CI)=0.67-1.05,P=0.12

15、),實驗組有利于提高總生存的趨勢。在局部晚期的胃癌(III期)以上,實驗組顯著提高了患者的總生存(HR=0.60,95% CI=0.40-0.89,P=0.01)。實驗組還提高了局部控制率(HR=0.40,95% CI=0.26-0.61, P<0.001)。
  結(jié)論:研究表明術(shù)中放療(實驗組)可以提高局部晚期的胃癌(Ⅲ期或以上)的總生存,并且提高了胃癌的局部控制率,與對照組相比具有統(tǒng)計學(xué)意義。術(shù)中放療的優(yōu)點仍需要大規(guī)模的臨床隨

16、機對照實驗來研究,從而提高胃癌綜合治療的療效。
  第四章 機器人與開放胃切除術(shù)對胃癌治療療效的比較
  目的:評估機器人胃切除與開放胃切除治療胃癌的有效性及安全性。
  方法:全面搜索了PubMed、EMBASE、Cochrane Library及Web of Knowledge等數(shù)據(jù)庫。對比較胃癌治療中機器人胃切除術(shù)及開放胃切除術(shù)的研究進行了評價,同時使用術(shù)中及術(shù)后的結(jié)果來評估手術(shù)的安全性及有效性,根據(jù)資料的異質(zhì)性

17、選用固定或隨機效應(yīng)模型進行分析。
  結(jié)果:納入了4項包含5780例胃癌病人的研究,其中520例(9.00%)采用機器人胃切除術(shù),5260例(91%)采用開放胃切除術(shù),相比開放胃切除術(shù),機器人胃切除術(shù)的手術(shù)時間更長(加權(quán)均數(shù)差(WMD)=92.37,95%可信區(qū)間(CI):55.63-129.12,P<0.00001)、失血量更少(WMD):-126.08,95% CI:-189.02--63.13, P<0.0001),住院時間

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