MCSF對(duì)體外培養(yǎng)的子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞的增殖及分化的影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文MCSF對(duì)體外培養(yǎng)的子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞的增殖及分化的影響姓名：白濤申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：婦產(chǎn)科學(xué)指導(dǎo)教師：曲陸榮2000.4.1(3)月經(jīng)周期為28～30天(4)按Noyes標(biāo)準(zhǔn)確定為增殖晚期、分泌早期內(nèi)膜二、體外培養(yǎng)ESC負(fù)荷試驗(yàn)操作步驟無菌收取切除子宮的內(nèi)膜組織，用生理鹽水洗去表面血液。在平皿中將內(nèi)膜剪碎成lmm3的小塊后，轉(zhuǎn)移到離心管中，加oZ5％胰酶，置于37℃水浴中消化30分鐘。濾過細(xì)胞懸液到另一離心管

2、中分離出子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞。將細(xì)胞液在1000轉(zhuǎn)／分下離心兩次，每次10分鐘。向沉淀中加入含10％小牛血清的1640液，制成單細(xì)胞懸液。應(yīng)用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，調(diào)整細(xì)胞濃度為10e個(gè)／毫升。接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，置37℃5％CO：培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)，棄培養(yǎng)液。一組分別加入含10％小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液及濃度為0、400pmol／L、800pmol／L、1600pmol／、2400pmol／L、3200pmol／L的M

3、CSF，另一組分別加入含10％小牛血清的RPMI一1640培養(yǎng)液及10“mol／L孕酮(MP)，106MPq200pmol／LMCSF，10—6MP400pmol／LMCSF，10—6MP800pmol／LMCSF，10—6MP1600pmol／LMCSF，10—6MP2400pmol／LMCSF，分別以0，10_6MP為對(duì)照培養(yǎng)2、4、6天時(shí)分別收集培養(yǎng)上清，～30“C保存待檢。上述所添加的P及MCSF濃度是根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果所設(shè)定的。三

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