作用于DNA損傷修復(fù)通路的藥物在乳腺癌治療中的臨床前及臨床研究.pdf

1、第一部分通過(guò)ATM通路增強(qiáng)PARP抑制劑在乳腺癌細(xì)胞中敏感性的研究
　　近年來(lái)的研究表明，PARP抑制劑在BRCA1/2突變的乳腺癌和卵巢癌中顯示出良好的療效。PARP抑制劑在BRCA1/2突變腫瘤中的高敏感性是由于“協(xié)同致死”效應(yīng)。BRCA1/BRCA2是參與細(xì)胞DNA損傷后同源重組修復(fù)(HR)的關(guān)鍵分子，而PARP-1則是介導(dǎo)DNA單鏈損傷后堿基切除修復(fù)過(guò)程的重要分子。PARP-1功能缺失的細(xì)胞中單鏈損傷無(wú)法及時(shí)修復(fù)，從而在D

2、NA復(fù)制叉處累積成為雙鏈損傷，這種DNA雙鏈損傷在BRCA1/2功能缺失的細(xì)胞中無(wú)法得到有效修復(fù)，從而引起細(xì)胞死亡。53BP1缺失是BRCA1突變細(xì)胞對(duì)PARP抑制劑的耐藥的機(jī)制之一。53BP1缺失可逆轉(zhuǎn)BRCA1缺失細(xì)胞中的部分HR缺損。ATM也是DNA雙鏈損傷應(yīng)答過(guò)程中的重要調(diào)節(jié)分子。細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)DNA損傷之后，ATM迅速自磷酸化（重要標(biāo)志位其絲氨酸1981位點(diǎn)磷酸化），并磷酸化一系列下游底物，包括細(xì)胞周期檢測(cè)點(diǎn)激酶Chk2、DNA修

3、復(fù)相關(guān)分子BRCA1和轉(zhuǎn)錄因子p53等。ATM異常見于多種實(shí)體腫瘤和造血系統(tǒng)腫瘤。由于ATM與BRCA1一樣，也參與PARP抑制劑導(dǎo)致的DNA損傷的修復(fù)過(guò)程，且可能主要是通過(guò)同源重組的方式。我們的研究目的在于探索三陰性及非三陰性乳腺癌細(xì)胞系中PARP與ATM是否具有協(xié)同致死效應(yīng)，以及53BP1對(duì)這種協(xié)同效應(yīng)的影響。
　　本研究中使用PARP抑制劑Olaparib和ATM抑制劑Ku-55933處理三陰性及非三陰性乳腺癌細(xì)胞。結(jié)果表明

4、ATM抑制劑能夠增強(qiáng)PARP抑制劑在三陰性與非三陰性乳腺癌細(xì)胞中的細(xì)胞毒作用，表現(xiàn)在生長(zhǎng)抑制、克隆形成能力的抑制和促進(jìn)凋亡上;二者的協(xié)同作用在三陰性乳腺癌細(xì)胞系中似乎更加明顯。此外，Olaparib和Ku-55933還能聯(lián)合誘導(dǎo)γ-H2AX發(fā)生核聚集，提示聯(lián)合用藥增加了對(duì)DNA的損傷，特別是增加了雙鏈損傷。為了探究53BP1對(duì)于ATM和PARP協(xié)同作用的影響，我們利用慢病毒感染構(gòu)建了穩(wěn)定敲降TP53BP1的細(xì)胞系MCF-7-sh53BP

5、1和CAL-51-sh53BP1。敲降53BP1后，Olaparib和Ku-55933以及二者聯(lián)合使用對(duì)細(xì)胞的增殖抑制作用及對(duì)細(xì)胞克隆形成的抑制作用均下降，提示53BP1表達(dá)降低能夠逆轉(zhuǎn)ATM抑制劑與PARP抑制劑聯(lián)合處理細(xì)胞的細(xì)胞毒作用。
　　以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明PARP抑制劑Olaparib和ATM抑制劑Ku-55933對(duì)三陰性乳腺癌和非三陰性乳腺癌細(xì)胞系具有一定的殺傷效果，并且二者聯(lián)合使用能夠?qū)θ橄侔┊a(chǎn)生協(xié)同致死效應(yīng)，明顯地提高

6、殺傷細(xì)胞的作用。同時(shí)，我們還發(fā)現(xiàn)三陰乳腺癌細(xì)胞系對(duì)Olaparib和Ku-55933以及二者的聯(lián)合使用的反應(yīng)更為敏感。此外，本研究首次發(fā)現(xiàn)了53BP1功能缺陷能夠?qū)е氯橄侔┘?xì)胞對(duì)Olaparib和Ku-55933以及二者的聯(lián)合使用產(chǎn)生一定程度的耐藥現(xiàn)象。這些結(jié)果將為臨床治療乳腺癌提供一定的理論依據(jù)。
　　第二部分比較含鉑與不含鉑方案治療三陰乳腺癌首發(fā)肺轉(zhuǎn)移的臨床研究
　　背景及目的：三陰性乳腺癌(TNBC)約占全部乳腺癌的1

7、5％～20％，具有發(fā)病年齡早（＜40歲）、期別晚、在非洲裔女性中發(fā)生率高的特點(diǎn)。此外，TNBC還易發(fā)生早期轉(zhuǎn)移，其復(fù)發(fā)時(shí)間多在初診后1-3年內(nèi)，此后復(fù)發(fā)率急劇下降。TNBC侵襲性強(qiáng)，較其他類型乳腺癌更易侵犯肺、腦等內(nèi)臟器官，骨轉(zhuǎn)移的發(fā)生率則相對(duì)較低?；仡櫺匝芯勘砻鱐NBC首發(fā)轉(zhuǎn)移部位與預(yù)后具有相關(guān)性;首發(fā)轉(zhuǎn)移部位為肺轉(zhuǎn)移者預(yù)后最好，其次為骨，肝、腦轉(zhuǎn)移預(yù)后最差?；熓悄壳稗D(zhuǎn)移性TNBC主要的治療手段。我們的前期研究結(jié)果提示含鉑方案治療晚

8、期TNBC的療效可能優(yōu)于非鉑方案。然而，目前尚無(wú)研究探索TNBC肺轉(zhuǎn)移的優(yōu)效化療方案。本研究擬比較含鉑與非鉑方案一線治療TNBC肺轉(zhuǎn)移的療效。
　　方法：符合入選標(biāo)準(zhǔn)的TNBC患者共65例，按照一線化療方案是否含鉑類藥物（順鉑或卡鉑），將其分為含鉑組與不含鉑組。含鉑組一線化療方案包括順鉑或卡鉑聯(lián)合紫杉類、吉西他濱、長(zhǎng)春瑞濱等。非含鉑組化療方案包括表阿霉素聯(lián)合紫杉醇或多西他賽、多西他賽或長(zhǎng)春瑞濱聯(lián)合卡培他濱等。含鉑聯(lián)合方案中鉑類給藥

9、方式均為:順鉑75mg/m2，第1天（或分2～3天），每21為一周期;卡鉑AUC=5，第1天，每21/28天為一周期。所有患者均在化療前及化療中每2周期進(jìn)行影像學(xué)檢查，以評(píng)價(jià)療效?；煹目陀^療效(objective response，OR)評(píng)價(jià)根據(jù)實(shí)體瘤評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)1.1版(RECIST1.1)。至少完成2周期化療者可評(píng)價(jià)臨床療效。化療方案療效的觀察指標(biāo)包括總生存時(shí)間(overall survival，OS)、無(wú)進(jìn)展生存時(shí)間(progres

10、sion freesurvival，PFS)和客觀緩解率(objective response rate，ORR)。療效觀察指標(biāo)包括無(wú)進(jìn)展生存期(PFS)、總生存期(OS)和客觀緩解(OR)。
　　結(jié)果：兩組基線大致平衡。含鉑組中(n=32)，2例(6.3％)獲完全緩解(CR)，16例(50.0％)獲部分緩解(PR)，11例(34.4％)疾病穩(wěn)定(SD)，而其余3例(9.4％)則疾病進(jìn)展(PD)。非含鉑組患者中(n=33)，2例(

11、6.1％)獲CR，6例(18.2％)獲PR，16例(48.5％) SD，9例(27.3％) PD。含鉑組患者中位PFS為10.0個(gè)月，顯著優(yōu)于接受非含鉑組患者（中位PFS6.0個(gè)月，P=0.012）;含鉑組患者OS也較非含鉑組顯著延長(zhǎng)（32月vs22月，P=0.006）。在對(duì)包括局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、肺轉(zhuǎn)移相關(guān)癥狀、一線含鉑方案化療、DFI、肺轉(zhuǎn)移灶數(shù)量和大小的COX多因素分析中，僅一線含鉑方案化療與OS顯著相關(guān)，為TNBC首發(fā)肺轉(zhuǎn)移的獨(dú)立預(yù)