DNA損傷修復(fù)通路在細(xì)胞應(yīng)對銀納米顆粒刺激中作用的研究.pdf

1、研究發(fā)現(xiàn)銀納米顆粒(AgNPs)有一定的細(xì)胞毒性和基因毒性，它會引起ROS增加而導(dǎo)致ATP合成異常、DNA損傷、細(xì)胞凋亡和壞死等。但是人體細(xì)胞是如何應(yīng)答AgNPs的脅迫目前尚不清楚，DNA損傷修復(fù)通路是否參與AgNPs引起的細(xì)胞應(yīng)答反應(yīng)是研究的一個空白點。本論文闡明了DNA損傷修復(fù)通路參與細(xì)胞應(yīng)答AgNPs引起的脅迫，并且起重要作用。
　　本文首先通過集落形成實驗研究不同濃度的AgNPs對正常人體細(xì)胞和有DNA損傷修復(fù)通路缺陷的人

2、體細(xì)胞分裂增殖的影響。與正常細(xì)胞相比，存在核苷酸切除修復(fù)通路(NER)缺陷的XPC、XPF細(xì)胞系的集落形成能力顯著降低。XPF同時參與部分DNA鏈間交聯(lián)(ICLs)損傷修復(fù)，在XPF點突變的細(xì)胞內(nèi)不能正常應(yīng)答AgNPs引起脅迫，表現(xiàn)出細(xì)胞正常的生長受到抑制。實驗結(jié)果初步說明人體細(xì)胞應(yīng)答AgNPs引起的脅迫需要DNA損傷修復(fù)通路的參與。
　　用不同AgNPs濃度處理48小時后，在有NER缺陷的XPF細(xì)胞中p53蛋白含量明顯增加，同時

3、p53蛋白Ser15位點磷酸化的程度顯著增加，可以推斷XPF突變細(xì)胞經(jīng)AgNPs處理后生長受到抑制是因為p53調(diào)控的網(wǎng)絡(luò)被激活，從而引導(dǎo)細(xì)胞進入周期停滯、細(xì)胞凋亡等反應(yīng)狀態(tài)，進一步證實了p53調(diào)控的相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄被激活，如MDM2、APAF1等的轉(zhuǎn)錄在XPF細(xì)胞中顯著變化，而在正常細(xì)胞中沒有明顯變化。闡明了XPF參與的DNA損傷修復(fù)通路在細(xì)胞應(yīng)對AgNPs引起的脅迫刺激中發(fā)揮積極的作用。
　　同時本文證實了Fe3O4NPs也會抑制X

4、PF缺陷細(xì)胞的正常生長，但是在細(xì)胞內(nèi)p53調(diào)控的應(yīng)答網(wǎng)絡(luò)沒有激活；與細(xì)胞周期相關(guān)的CHEK1及DNA損傷修復(fù)相關(guān)的RPA1、RPA2和RPA3的轉(zhuǎn)錄卻有顯著變化。這表明人體細(xì)胞應(yīng)對不同納米顆粒的刺激有共性也有特異性。
　　綜上所述，XPF參與的DNA損傷修復(fù)通路不只是在細(xì)胞應(yīng)對AgNPs的刺激中發(fā)揮重要的作用，人體細(xì)胞同樣需要DNA損傷修復(fù)通路應(yīng)對Fe3O4NPs造成的脅迫。因此，DNA損傷修復(fù)通路是人體細(xì)胞應(yīng)對AgNPs/Fe3