肺康飲含藥血清對人肺癌細胞(NC-H446)細胞增殖凋亡的實驗研究.pdf

1、目的：研究肺康飲的藥物血清對人肺癌細胞（NC-H446）形態(tài)學、增殖與細胞周期和凋亡率，及其相關基因B細胞白血病/淋巴瘤-2基因（bcl-2）和p53蛋白的影響，探討肺康飲治療肺癌的作用及機制。
　　 方法：研究對象由中國醫(yī)科大學細胞室提供的人非小細胞肺癌NC-H446細胞株，本院實驗中心細胞室保存。通過給正常大鼠灌胃制備肺康飲的藥物血清，設為含藥血清組，正常大鼠血清設為空白血清組，研究不同血清對肺癌細胞的影響。
　　

2、 （1）制作肺癌細胞的超薄切片，在透射電鏡下觀察肺癌細胞的形態(tài)學改變；
　　 （2）采用咪哇比色分析法（MTT）檢測不同濃度藥物血清對肺癌細胞增殖的影響；
　　 （3）采用流式細胞儀檢測藥物血清對肺癌細胞周期和凋亡率的影響
　　 （4）應用免疫組化方法，檢測p53、bcl-2蛋白表達情況。所有數(shù)據(jù)均用SPSS12軟件進行統(tǒng)計學處理。
　　 結果：
　　 1.培養(yǎng)NC-H446人肺癌細胞電鏡觀察，細

3、胞核、核膜清晰可見，胞質內可見Mi、rER、Ri結構，細胞表面Vi。藥物血清處理24 h，細胞在電鏡下可見細胞核染色質濃淡不均，異染色質凝聚在核周邊，可見核仁，細胞膜起皺呈出芽狀。藥物血清處理48 h，可見凋亡小體形成，小體內Mi、rER、外膜清晰，形成多個凋亡小體。
　　 2.與空白血清組比較，肺康飲藥物血清作用12h既有凋亡峰（7.43％）出現(xiàn)，24h達高峰為26.10％，而對照組僅為6.71％，藥物血清作用后，G0/G1細

4、胞明顯減少， S期細胞增多5％、10％和15％濃度組的含藥血清對肺癌細胞的增殖均有明顯的抑制作用（P<0.05），其中10％含藥血清組的抑制率顯著強于5％含藥血清組（P<0.05），但15％含藥血清組與10％含藥血清組比較無顯著性差異（P>0.05）
　　 3.與空白血清組比較，含藥血清組肺癌細胞周期縮短和凋亡率明顯增高，其差異具有極顯著性（P<0.01）。
　　 4.免疫細胞化學研究結果：p53主要定位在細胞核，呈棕黃

5、色顆粒，部分細胞漿也有淡染，中藥組呈強陽性。bcl-2主要表現(xiàn)為胞漿著色呈棕黃色顆粒，中藥組反應強度下降。而空白對照組未見陽性表達。
　　 5.流式細胞儀分析結果：p53、bcl-2在NC-H446人肺癌細胞株中都有不同程度的表達，藥物血清作用后，p53表達增強，bcl-2表達降低，隨著作用時間延長，表達變化增強。
　　 結論：
　　 1.肺康飲藥物血清具有抑制人肺癌（NC-H446）細胞株增殖作用。