曲古抑菌素對小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系NCI-H446的誘導(dǎo)分化及凋亡作用研究.pdf

1、研究目的:
　　 觀察人小細(xì)胞肺癌(SCLC)NCI-H446細(xì)胞的干細(xì)胞特性(Stemness),探討組蛋白去乙?；敢种苿┣乓志?TSA)對NCI-H446細(xì)胞的誘導(dǎo)分化及凋亡的作用機制。為進一步應(yīng)用組蛋白去乙?；敢种苿?HDACI)或其它細(xì)胞誘導(dǎo)分化劑治療小細(xì)胞肺癌提供了理論和實驗基礎(chǔ)。
　　 研究方法:
　　 (1)NCI-H446細(xì)胞經(jīng)RPMI1640完全培養(yǎng)基培養(yǎng)傳代后,用干細(xì)胞標(biāo)志蛋白巢蛋白(

2、nestin),CD133,波形蛋白(vimentin)和CD44的抗體對進行免疫熒光染色,鑒定該細(xì)胞的干細(xì)胞特性。
　　 (2)NCI-H446細(xì)胞經(jīng)TSA誘導(dǎo)培養(yǎng)后,用神經(jīng)標(biāo)志蛋白神經(jīng)絲蛋白200(NF-200),βⅢ-Tubulin,微管相關(guān)蛋白2(MAP2)和BM88及細(xì)胞增殖核抗原ki67的抗體進行免疫熒光染色和免疫印跡測定(WesternBlotting法),觀察NCI-H446細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞分化的成熟程度和細(xì)胞增殖

3、指數(shù)的變化。
　　 (3)用TUNEL染色法計算細(xì)胞的凋亡指數(shù)并用免疫印跡法測定細(xì)胞的凋亡相關(guān)蛋白Caspase3,Bax,Bcl-2表達(dá)水平的變化,觀察TSA對NCI-H446細(xì)胞的誘導(dǎo)凋亡作用。
　　 研究結(jié)果:
　　 (1)在小細(xì)胞肺癌NCI-H446細(xì)胞株中,nestin,CD133,vimentin和CD44高表達(dá)。
　　 (2)經(jīng)TSA誘導(dǎo)后的NCI-H446細(xì)胞株,NF-200,βⅢ-Tub