椎間盤退變程度與衰老信號途徑p16INK4a-Rb關(guān)系的初步研究.pdf

1、目的：探討衰老信號途徑p16INK4a/Rb與椎間盤退變程度之間的關(guān)系；
　　 方法：成年健康新西蘭白兔15只，隨機分為5組(每組3只)：第2到5組，每組，采用倒八字手術(shù)入路，針刺法制作椎間盤退變模型(L3/4、L4/5和L5/6)，分別在術(shù)后2周、4周、8周及12周時進行相關(guān)檢查；第1組只進行手術(shù)，而不針刺椎間盤，在術(shù)后12周時進行同樣的檢查。各組在相應(yīng)時間點行MRI檢查，觀察椎間盤T2信號的變化情況。應(yīng)用改良Thompson

2、椎間盤退變分級系統(tǒng)對各組(L3/4、L4/5和L5/6)椎間盤進行退變程度分級(見表1)。將各組(L3/4、L4/5和L5/6)椎間盤統(tǒng)一編號，并按照改良Thompson分級系統(tǒng)分為4組：A組(Ⅰ級)、B組(Ⅱ級)、C組(Ⅲ級)和D組(Ⅳ級)。在上述每組中隨機抽取3枚椎間盤，行組織學(xué)檢查，按照Nishimura椎間盤退變分級法進行組織學(xué)評估(見表2)，采用免疫組化檢測Ⅱ型膠原對椎間盤退變模型進行進一步評價，采用Western blot檢

3、測其中p16INK4a和Rb的蛋白水平。
　　 結(jié)果：1)各組均成功實施手術(shù)，術(shù)后相應(yīng)時間點進行MRI檢查，改良Thompson椎間盤退變分級系統(tǒng)將椎間盤進行分組：假手術(shù)組中有8枚椎間盤為Ⅰ級和1枚椎間盤為Ⅱ級；術(shù)后2周組有2枚Ⅰ級，6枚Ⅱ級和1枚Ⅲ級；術(shù)后4周組有5枚Ⅱ級和4枚Ⅲ級；術(shù)后8周組有2枚Ⅱ級，5枚Ⅲ級和2枚Ⅳ級；術(shù)后12周組有2枚Ⅲ級和7枚Ⅳ(Ⅳ級)級。共計A組(Ⅰ級)10枚，B組(Ⅱ級)14枚，C組(Ⅲ級)12枚

4、和D組9枚。
　　 2)采用Nishimura椎間盤退變分級法對上述椎間盤進行組織學(xué)評估：A組有3枚0級；B組有1枚1級，2枚2級；C組有1枚1級，1枚2級和1枚3級；D組有1枚4級和2枚5級。
　　 3)各組Ⅱ型膠原免疫組化灰度值分別為：A組144.30±0.68，B組148.77±3.09，C組151.47±2.93和D組1.55.80±4.75。各組之間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(F=14.36，P=0.01)。各組兩兩間

5、進行比較，除B組和C組之間無明顯統(tǒng)計學(xué)差異外(P>0.05)，其余差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。
　　 4)各組p16INK4a相對蛋白含量為：A組0.20±0.05，B組0.56±0.31，C組0.92±0.09和D組1.62±0.24。各組之間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(F=35.22，P<0.01)。各組兩兩間進行比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。從A組到D組，隨著椎間盤退變程度的增加，p16INK4a相對蛋白含量呈

6、逐漸升高趨勢(P<0.05)。各組非磷酸化Rb相對蛋白含量為：A組0.51±0.04，B組0.88±0.19，C組1.114±0.13和D組1.71±0.27。各組之間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(F=32.12，P<0.01)。各組兩兩間進行比較，除B組和C組之間無明顯統(tǒng)計學(xué)差異外(P>0.05)，其余各組間的差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。從A組到D組，隨著椎間盤退變程度的增加，Rb相對蛋白含量呈逐漸升高趨勢(P<0.05)。