α-硫辛酸對(duì)硫酸吲哚酚致臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷的影響.pdf

1、目的:慢性腎臟疾病(chronic kidney disease，CKD)患者尤其是終末期腎衰患者的心血管發(fā)病率和死亡率遠(yuǎn)高于普通人群。加速性動(dòng)脈粥樣硬化是尿毒癥患者心血管并發(fā)癥的主要病理機(jī)制之一，起始于血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷。CKD患者隨著腎小球?yàn)V過(guò)率降低，腎毒性物質(zhì)在體內(nèi)蓄積，可誘導(dǎo)氧化應(yīng)激反應(yīng)，促進(jìn)動(dòng)脈血管產(chǎn)生粥樣硬化病變。硫酸吲哚酚(indoxylsulfate，IS)即是其中一種代表性的蛋白結(jié)合毒素，誘發(fā)氧化應(yīng)激使心血管系統(tǒng)受損并加

2、速慢性腎臟病進(jìn)程。α-硫辛酸(α-lipoic acid，LA)是天然存在的最強(qiáng)抗氧化劑，目前在糖尿病、糖尿病并發(fā)癥、缺血再灌注損傷等疾病的防治方面應(yīng)用較廣泛，而在CKD患者應(yīng)用較少。本研究以人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(human umbilical vein endothelial cell，HUVEC)為對(duì)象，探討α-硫辛酸能否對(duì)硫酸吲哚酚致血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生的氧化損傷起到保護(hù)作用及其可能的作用機(jī)制，為α-硫辛酸在慢性腎臟病中應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

3、
　　方法:培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，將其分成對(duì)照組（CONTROL組），α-硫辛酸組（LA組），硫酸吲哚酚組（IS組）和硫酸吲哚酚+α-硫辛酸組(IS+LA組)。用MTS法檢測(cè)細(xì)胞存活率;硫代巴比妥酸法測(cè)定丙二醛(MDA)的含量;用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧自由基(reactiveoxygen species，ROS)的變化;應(yīng)用RT-PCR法測(cè)定NADPH氧化酶4(NOX4) mRNA的表達(dá)。
　　統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用GraphP

4、ad Prism5軟件，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)中計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。多組間均數(shù)比較采用單因素方差分析（ANOVA），均數(shù)兩兩比較采用Bonferroni法檢驗(yàn)，P＜0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。各組實(shí)驗(yàn)至少重復(fù)3次。
　　結(jié)果:
　　1、IS呈濃度（100、200、500μm/L）依賴性的降低細(xì)胞存活率，大于等于200μm/L時(shí)與對(duì)照組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001);而LA呈濃度(20、50、100、250、500μm/L)依賴性

5、的提高細(xì)胞存活率，大于等于250μm/L時(shí)與對(duì)照組有顯著性差異(P＜0.01);250μm/L LA預(yù)處理細(xì)胞再與500μm/L IS共培養(yǎng)，與IS組（500μm/L）相比，細(xì)胞存活率顯著提高(P＜0.01)。選定500μm/L和250μm/L分別作為IS和LA繼續(xù)實(shí)驗(yàn)濃度。
　　2、與對(duì)照組（1.29±0.40nmol/ml）相比，IS組（2.87±0.66nmol/ml）細(xì)胞MDA含量升高(P＜0.001);細(xì)胞經(jīng)LA預(yù)處理，

6、IS+LA組（2.04±0.46nmol/ml）較IS組（2.87±0.66nmol/ml）MDA含量降低(P＜0.05)。
　　3、與對(duì)照組(62.07±1.60％)相比，IS組(76.17±2.26％)ROS陽(yáng)性細(xì)胞率增加(P＜0.001）;細(xì)胞經(jīng)LA預(yù)處理，IS+LA組(69.70±3.01％)較IS組(76.17±2.26％)ROS陽(yáng)性細(xì)胞率降低(P＜0.05)。
　　4、與對(duì)照組（1.00±0.24）相比，IS組（