法舒地爾對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞損傷的影響.pdf

1、目的：
　　觀(guān)察法舒地爾對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞損傷的影響，并探討其可能的作用機(jī)制。
　　方法：
　　1.用0.1％I型膠原酶消化分離人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，加入ECM完全培養(yǎng)基中培養(yǎng)，用胰蛋白酶進(jìn)行消化傳代培養(yǎng)，用倒置顯微鏡對(duì)培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行形態(tài)觀(guān)察和免疫組化鑒定。
　　2.人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞HUVECs隨機(jī)分為3組：對(duì)照組（加入內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基）、LPS組（加入0.1ug/ml LPS）、法舒地爾組（3.275 u

2、g/ml的法舒地爾+0.1ug/ml LPS)。
　　3. Western-blot檢測(cè) RhoA、ROCK2、p-ERM蛋白表達(dá)情況，熒光定量PCR檢測(cè)RhoA、ROCK2、p-Ezr mRNA表達(dá)。
　　4.激光共聚顯微鏡觀(guān)察細(xì)胞骨架肌動(dòng)蛋白F-actin的分布變化。
　　結(jié)果：
　　1.原代培養(yǎng)的內(nèi)皮細(xì)胞在接種后24h后完全貼壁生長(zhǎng)，第3天融合呈鋪路石樣鑲嵌排列，免疫組化見(jiàn)內(nèi)皮細(xì)胞中胞漿中第VIII因子相關(guān)

3、抗原呈陽(yáng)性反應(yīng)，證實(shí)為內(nèi)皮細(xì)胞。
　　2.與對(duì)照組相比，LPS組RhoA、ROCK2和 p-ERM蛋白及基因水平顯著升高（P<0.01）；與模型組相比，F(xiàn)asudil組中ROCK2和 p-ERM顯著降低（P<0.01)，RhoA沒(méi)有明顯差異（P>0.05）。LPS誘導(dǎo)了細(xì)胞骨架肌動(dòng)蛋白F-act-in的分布變化，法舒地爾能夠抑制這種改變。
　　結(jié)論：
　　1.本實(shí)驗(yàn)成功分離和培養(yǎng)原代HUVECs。
　　2. Rh