硫酸吲哚酚誘導(dǎo)臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞損傷及α-硫辛酸的干預(yù)作用.pdf

1、背景:內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙和氧化應(yīng)激是心血管疾病發(fā)生發(fā)展的主要機(jī)制，慢性腎臟病(Chronic renal disease CKD)患者體內(nèi)尿毒癥毒素堆積是并發(fā)心血管疾病的高風(fēng)險(xiǎn)因素;其中蛋白結(jié)合型尿毒癥毒素硫酸吲哚酚(Indoxyl Sulfate IS)能產(chǎn)生促氧化的作用，誘導(dǎo)血管內(nèi)皮功能障礙，促進(jìn)心血管疾病的發(fā)生發(fā)展，近年來抗氧化劑改善內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙的研究備受關(guān)注。
　　目的:以人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(Human umbilical

2、 vein endothelial cellsHUVEC)為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停接懣寡趸瘎┝蛐了?alpha-lipoic acid LA)是能否干預(yù)尿毒癥毒素硫酸吲哚酚(IS)誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激和血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷并初步探討其作用機(jī)制。
　　方法:對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮傳代細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)，將其分成正常對(duì)照組、硫酸吲哚酚(IS)組、硫辛酸(LA)組及硫酸吲哚酚和硫辛酸聯(lián)合組（簡(jiǎn)稱LA+IS組）;通過ELISA法測(cè)定細(xì)胞內(nèi)3-硝基酪氨酸(3-Nitro

3、-L-tyrosine3-NT)的含量，黃嘌呤氧化酶法測(cè)定細(xì)胞超氧化物歧化酶(Superoxidedismutase SOD)活性，比色法測(cè)還原性谷胱甘肽(Glutathione GSH)的含量，硝酸還原酶法測(cè)量細(xì)胞培養(yǎng)液中一氧化氮(Nitric oxide NO)的含量及比色法測(cè)一氧化氮合成酶(Nitric oxide synthase NOS)活性，通過RT-PCR及熒光定量PCR技術(shù)分析內(nèi)皮型一氧化氮合成酶(Endothelial

4、 nitric oxidesynthase eNOS)的表達(dá)。
　　統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用 SPSS17.0軟件，結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。多組間均數(shù)比較采用單因素方差分析(ANOVA)，均數(shù)兩兩比較采用Bonferroni法檢驗(yàn)，P＜0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。各組實(shí)驗(yàn)至少重復(fù)4次。
　　結(jié)果:
　　1、血管內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激指標(biāo)
　?、贉y(cè)定培養(yǎng)液GSH含量，與正常對(duì)照組（78.426±2.543mg/l）相比，IS組（54.

5、683±3.408mg/l）GSH水平明顯降低（P＜0.001），LA組(89.754±2.938 mg/l)較之升高(P＜0.001)，使用LA干預(yù)后的IS+LA組(81.348±3.254mg/l)較IS組(54.683±3.408mg/l)GSH升高(P＜0.001)。
　　②相比對(duì)照組SOD活性(18.186±2.106U/mgprot)， IS組(12.984±1.413 U/mgprot)明顯降低(P＜0.001)，使

6、用LA干預(yù)后(20.390±1.124 U/mgprot)活性升高(P＜0.001)，而使用IS+LA同時(shí)干預(yù)后(16.806±1.237U/mgprot)較IS組(12.984±1.413 U/mgprot)SOD升高(P＜0.001)。
　　2、內(nèi)皮細(xì)胞NO相關(guān)指標(biāo)
　　①與對(duì)照組NO(48.235±2.508umol/l)相比，IS組(35.618±3.843umol/l)顯著性降低(P＜0.001);LA組(52.3

7、29±2.935umol/l)和IS+LA組(42.565±3.273umol/l)較IS組（35.618±3.843umol/l）NO升高(P＜0.001)。
　　②NOS活性IS組(0.835±0.057U/L)較對(duì)照組(0.967±0.032U/L)相比，顯著性降低(P＜0.001)，LA組(1.054±0.083 U/L)較之明顯升高(P＜0.001)，IS+LA組(0.902±0.064U/L)較IS組(0.835±0.

8、057U/L)NOS活性升高(P＜0.05)。
　?、塾肊LISA法測(cè)定勻漿中3-NT含量，與對(duì)照組(38.175±5.403nmol/l)相比，IS組(47.665±4.934nmol/l)產(chǎn)生3-NT含量明顯增加(P＜0.001)，LA組(30.473±3.496nmol/l)較之水平下降（P＜0.001），而IS+LA組（35.661±4.726nmol/l）較IS組(47.665±4.934nmol/l)產(chǎn)生3-NT的水平

9、明顯下降(P＜0.001)。
　?、躌T-PCR檢測(cè)結(jié)果提示:eNOS表達(dá)與對(duì)照組(1.091±0.064)相比，IS組(1.054±0.092)呈現(xiàn)表達(dá)下調(diào)（P＜0.05），而用LA處理后，LA組(1.287±0.113)明顯上調(diào)（P＜0.05），IS+LA組（1.096±0.073）eNOS的表達(dá)水平也比較高（P＜0.05）。
　　結(jié)論:
　　1、硫酸吲哚酚可誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激
　　2、α-硫辛酸可能通過糾