聚多糖脫乙酰酶基因家族VdpdaAs在大麗輪枝菌中的功能分析.pdf

1、大麗輪枝菌(Verticillium dahliae Kleb.)能夠在多種植物包括棉花上引起萎蔫病害，對農(nóng)業(yè)生產(chǎn)造成巨大的危害。但是由于棉花黃萎病屬于土傳維管束病害，病原菌傳播途徑多，存活時間長、生理小種變異多，抗病育種工作也相對滯后，所以棉花黃萎病的防治難度很大，至今還沒有有效的防治措施。因此，本課題組利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化和同源重組等一系列分子生物學(xué)技術(shù)，對大麗輪枝菌中的功能基因進行深入研究。本研究在輪枝菌中發(fā)現(xiàn)一個聚多糖脫乙酰酶基

2、因VdpdaA，通過在大麗輪枝菌基因組庫中查找發(fā)現(xiàn)，該基因家族存在三個基因，依次命名為VdpdaA1、VdpdaA2和VdpdaA3，對該基因家族功能分析得知：該家族基因在大麗輪枝菌的生長、產(chǎn)孢形成、菌絲生長和致病性過程中起著重要的作用。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴從已構(gòu)建的落葉型強致病力菌株V592的突變體庫中篩選到一株黑色微菌核產(chǎn)生受阻、致病性下降的突變體J105。利用Southern雜交技術(shù)對篩選到的突變體進行初步研究發(fā)現(xiàn)，

3、T-DNA在該株突變體中屬于單拷貝插入，利用TAIL-PCR等技術(shù)對該突變體進一步研究發(fā)現(xiàn)，一個編碼聚多糖脫乙酰酶的（polysaccharide deacetylase family protein gen）基因VdpdaA1（VDAG-07142）的突變導(dǎo)致了突變體J105致病性顯著下降，黑色微菌核產(chǎn)生受阻。⑵通過在大麗輪枝菌基因組庫中查找發(fā)現(xiàn)，該基因還同時存在著另外兩個同源基因，分別是VDAG-07727和VDAG-09706，三

4、個基因均屬于一個基因家族，在本研究中，這三個基因被依次命名為VdpdaA1、VdpdaA2和VdpdaA3。以pRF-HU2載體為基本骨架，成功構(gòu)建了VdpdaA1、VdpdaA2和VdpdaA3的同源重組敲除載體。通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化法（ATMT）轉(zhuǎn)化大麗輪枝菌、DNA及RNA的雜交驗證，每個基因分別得到2株敲除突變體△VdpdaA1-a、△VdpdaA1-b；△VdpdaA2-a、△VdpdaA2-b；△VdpdaA3-a和△Vdp