斜紋夜蛾幾丁質(zhì)脫乙酰酶基因克隆及功能研究.pdf

1、幾丁質(zhì)脫乙酰酶(chitin deacetylase)是一種昆蟲體內(nèi)幾丁質(zhì)降解途徑中的酶，它能降解幾丁質(zhì)生成殼聚糖。斜紋夜蛾(Spodoptera litura)是一種世界性分布廣泛的害蟲，發(fā)生蟲害時給農(nóng)業(yè)生產(chǎn)造成巨大的經(jīng)濟損失。深入研究斜紋夜蛾的生理生化機制，并在此基礎(chǔ)上探尋有效的防治方法已勢在必行。本論文以斜紋夜蛾為實驗對象，研究斜紋夜蛾幾丁質(zhì)脫乙酰酶功能為斜紋夜蛾綠色防控提出新的思路與方法。主要結(jié)果如下:
　　從斜紋夜蛾轉(zhuǎn)錄

2、組數(shù)據(jù)中篩選并克隆6個斜紋夜蛾幾丁質(zhì)脫乙酰酶基因(SlCDA)，分別命名為SlCDA1、SlCDA2、SlCDA3、SlCDA4、SlCDA5、SlCDA6，開放閱讀框分別包含1620、1446、7224、1131、1167、1125個堿基，分別編碼540、482、2408、377、389、375個氨基酸。系統(tǒng)發(fā)育分析結(jié)果表明:SlCDA1屬于第一組(GroupⅠ)，SlCDA2屬于第三組(GroupⅢ)，SlCDA3屬于第四組(Gro

3、upⅣ)，SlCDA4、SlCDA5、SlCDA6均屬于第五組(GroupⅤ)。氨基酸序列同源性比對結(jié)果顯示，SlCDA與家蠶、棉鈴蟲等昆蟲的幾丁質(zhì)脫乙酰酶氨基酸序列相似度極高。
　　通過qRT-PCR確定了6個SlCDA基因表達譜，結(jié)果表明:SlCDA1、SlCDA2在表皮中周期性表達，蛻皮后表達量急劇上升，在預蛹期第一天達到最高;SlCDA3在表皮及脂肪體中均有一定表達，但在檢測時期內(nèi)無特異性;SlCDA4、SlCDA6在6齡

4、第2天的中腸中表達量最高;SlCDA5在檢測時期內(nèi)表皮、脂肪體和中腸中表達水平均偏低。表明SlCDA1、SlCDA2可能與斜紋夜蛾蛻皮生理過程相關(guān)，SlCDA4、SlCDA6可能與中腸生長發(fā)育相關(guān)，SlCDA3、SlCDA5可能不參與斜紋夜蛾的蛻皮等過程。選擇斜紋夜蛾表皮特異性基因SlCDA1、SlCDA2對斜紋夜蛾進行RNA干擾并檢測干擾效率，結(jié)果顯示目的基因表達量下調(diào)但并沒有對當代斜紋夜蛾致畸或致死。
　　采用昆蟲桿狀病毒表達