髓過氧化物酶在高脂血癥大鼠心肌缺血-再灌注損傷中的意義.pdf

1、目的：利用食源性高脂血癥大鼠模型，建立在體大鼠心肌缺血/再灌注模型，分析高脂血癥是否導(dǎo)致大鼠心肌對(duì)缺血/再灌注損傷敏感性增加；如果是，這種敏感性的增加是否與高脂血癥大鼠缺血/再灌注后缺血區(qū)心肌組織髓過氧化物酶(MPO)表達(dá)及活性異常增高相關(guān)。 方法：選用雄性Wistar大鼠，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為3組：①正常飲食組(18只)，普通飼料飼養(yǎng)8周；②高脂飲食組(18只)，高脂飼料飼養(yǎng)8周，缺血/再灌注術(shù)前連續(xù)3天腹腔注射藥物溶劑(DMSO

2、)；③高脂飲食+氨苯砜組(18只)，高脂飼料飼養(yǎng)8周，缺血/再灌注術(shù)前連續(xù) 3天腹腔注射氨苯砜(MPO清除劑，100 μmol/kg，一次/天)。結(jié)扎大鼠左冠狀動(dòng)脈前降支缺血30分鐘，再灌注3小時(shí)；同時(shí)在體監(jiān)測(cè)各項(xiàng)心功能指標(biāo)；利用血脂試劑盒檢測(cè)血脂水平；以Evence blue和TTC復(fù)染法測(cè)定心梗面積；以TUNEL染色和caspase-3活性反應(yīng)心肌細(xì)胞凋亡；分別以酶聯(lián)免疫吸附法及免疫組化法檢測(cè)心肌組織MPO的水平和分布。 結(jié)

3、果： 1．食源性大鼠高脂血癥動(dòng)物模型的建立：高脂大鼠體重4周達(dá)277±12g、8劇達(dá)423±36g，較正常飲食組大鼠明顯升高。高脂大鼠4周血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)水平較4周前顯著提高，明顯高于同期普通飲食大鼠。 2．高脂血癥大鼠心肌缺血/再灌注損傷敏感性增加：與正常心肌缺血/再灌注組比較，高脂組大鼠心肌缺血/再灌注后9個(gè)時(shí)間點(diǎn)的心功能(收縮指數(shù)CI=dp/dt<,max>/

4、IP；+dp/dt<,max>)均有明顯下降(P<0.05)、心梗面積增大(35±2％vs.56±6％，P<0.05)、心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)(15±3％vs.22±2％，P<0.05)升高以及caspase-3比活性升高(P<0.05)。 3．高脂血癥大鼠心肌缺血/再灌注后缺血區(qū)MPO沉積增多、活性升高：與正常心肌缺血/再灌注組比較，高脂血癥大鼠缺血區(qū)心肌組織MPO大量沉積、活性顯著升高(168±13.4 U/100 mg濕組織 v

5、s.206±15.6 U/100 mg濕組織，P<0.05)。 4．高脂血癥大鼠心肌缺血/再灌注后MPO活性與心肌損傷指標(biāo)呈正相關(guān)：心肌梗塞面積與MPO活性呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)為r=0.706，P<0.01：凋亡指數(shù)與MPO活性呈正相關(guān)，r=0.685，P<0.01；caspase-3活性與MPO活性呈正相關(guān)，r=0.739，P<0.01。提示，高脂血癥大鼠心肌對(duì)缺血/再灌注損傷易感性升高可能與缺血區(qū)心肌組織異常高表達(dá)的MPO相關(guān)

6、，即MPO可能參與并加重了高脂血癥大鼠心肌缺血/再灌注損傷。 5．清除MPO后，高脂血癥大鼠缺血/再灌注后心肌損傷減輕，進(jìn)一步闡明高脂血癥大鼠缺血/再灌注后缺血區(qū)心肌組織MPO表達(dá)及活性升高可能是高脂血癥大鼠心肌對(duì)缺血/再灌注損傷敏感性增加的關(guān)鍵因素之一：為了進(jìn)一步驗(yàn)證結(jié)果4所提示的高脂血癥大鼠心肌對(duì)缺血/再灌注損傷易感性升高可能與缺血區(qū)心肌組織異常高表達(dá)的MPO具有相關(guān)性，我們應(yīng)用MPO清除劑氨苯砜于缺血/再灌注前清除MPO。

7、結(jié)果發(fā)現(xiàn)缺血/再灌注術(shù)后，與高脂血癥大鼠相比，氨苯砜組大鼠心功能(CI、+dp/dt<,max>)明顯改善(P<0.05)、心肌梗死面積(42±5％，P<0.05)減小、心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)(18±3％，P<0.05)以及caspase-3比活性降低(P<0.05)。進(jìn)一步提示MPO可能參與并加重了高脂血癥心肌缺血/再灌注損傷并使高脂血癥時(shí)心肌對(duì)缺血/再灌注損傷易感性升高。 結(jié)論： 1．高脂血癥可能導(dǎo)致大鼠心肌對(duì)缺血/再灌注