血管過(guò)氧化物酶在心肌缺血再灌注損傷中作用機(jī)制研究.pdf

1、研究背景:缺血--再灌注損傷是指心肌缺血恢復(fù)灌流后結(jié)構(gòu)與功能未得到改善反而損傷加劇的現(xiàn)象。臨床上心肌缺血--再灌注損傷通常發(fā)生在心肌梗死再通術(shù)、血管搭橋和溶栓治療后，導(dǎo)致梗死面積增大，心功能進(jìn)一步受損，嚴(yán)重影響治療效果。大量研究表明，氧化應(yīng)激水平增高是缺血--再灌注損傷的主要機(jī)制之一。 氧化應(yīng)激是指機(jī)體活性氧（ROS）大量蓄積而導(dǎo)致氧化損傷。生成ROS的酶系中以NADPH氧化酶（Nox）和過(guò)氧化物酶最為重要。過(guò)氧化物酶是一類含有

2、血紅素的酶，它可催化H2O2（弱氧化劑）成為HOC1（強(qiáng)氧化劑）而氧化體內(nèi)多種化學(xué)物質(zhì)。血管過(guò)氧化物酶（VPO）是新近報(bào)道的存在于心血管系統(tǒng)過(guò)氧化物酶家族成員中的一員，體外實(shí)驗(yàn)證明VPO具有髓過(guò)氧化物酶（MPO）類似的特性，能將H2O2轉(zhuǎn)化成為HOC1，推測(cè)其可能在氧化應(yīng)激中發(fā)揮重要作用。 大量文獻(xiàn)報(bào)道Nox酶系生成的ROS是心臟的主要來(lái)源。Nox催化的主要產(chǎn)物為O2-，經(jīng)SOD催化生成H2O2，成為VPO的底物。因此推測(cè)Nox

3、與VPO以H2O2為中介，在氧化應(yīng)激中發(fā)揮協(xié)同作用。 本實(shí)驗(yàn)將探討VPO是否參與了心肌缺血--再灌注誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激，并初步確定Nox與VPO是否在氧化應(yīng)激中具有協(xié)同作用，共同促進(jìn)了心肌的氧化損傷。 方法:雄性SD大鼠結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支缺血60 min，再灌注3h，再灌注前30 min腹腔注射apocynin（50 mg/kg）。實(shí)驗(yàn)分為正常對(duì)照組、假手術(shù)組、缺血--再灌注組和缺血--再灌注+apocynm組。RT-PC

4、R檢測(cè)VPO1、Nox2 mRNA表達(dá)水平；免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)VPO1、Caspase-3蛋白表達(dá)水平；TTC染色法測(cè)量心肌梗死面積；比色法測(cè)定血清肌酸激酶（CK）、心肌組織Nox2和Caspase-3活性；TUNEL檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡。 H9c2心肌細(xì)胞株于95％ N2、5％ CO2、低養(yǎng)培基缺氧24 h，然后改為95％空氣、5％ CO2、常養(yǎng)培基復(fù)氧12 h，復(fù)氧前給予apocynin（終濃度400μM）或間苯三酚（終濃度

5、600μM）。實(shí)驗(yàn)分為常氧組、溶媒組、低氧組、低氧+apocynin組和低氧+間苯三酚組。Hochest染色檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡。 與假手術(shù)組比較，缺血--再灌注組心肌梗死面積和心肌細(xì)胞凋亡顯著增加；血漿CK、Nox和Caspase-3活性顯著上升；心肌組織VPO1、Nox2 mRNA和Caspase-3蛋白表達(dá)水平顯著上調(diào)，這些作用被預(yù)先給予Nox抑制劑apocynin處理所逆轉(zhuǎn)。Apocynin對(duì)Nox2 mRNA的表達(dá)水平無(wú)顯